反向液相色譜法是色譜中的一種特種技術。應用此法研究藥物在正常人體內的藥動學，具有簡便，迅速，準確等特點。RP-HPLC-UV的分析檢測方法，該方法不需要特殊的設備，而且分析方法的穩定性好，精密度高，時間段，過程簡單，可以作為藥物定量分析方法。自從反相液相色譜法應用以來，有關此理論和實際應用的文獻已經大量出版。目前，反相液相色譜法已經為許多實驗室的常規手段。

　　1.用藥后的房水進行定量測量：

　　眼內藥代動力學實驗：雙眼滴入眼液，將獲取的房水用反相液相色譜法進行定量測量。結果滴眼后不同時間測定的房水中的藥物濃度不同，實驗結果提示局部點眼獲得的房水濃度低于對大多數真菌的低抑菌濃度說明單獨點眼效果不好。所以應配合全身用藥，改進用藥途徑增加眼內穿透力，以及增加點眼次數來克服此弊端。因此頻繁點眼也是增加眼內穿透性，縮短病程的重要手段。病例病程較長滴眼次數過少可能事原因之一。

　　液相色譜儀在眼內藥代動力學實驗中的應用

　　2.測量人體組織液中藥物濃度：

　　采用乙酸乙酯直接提取血漿樣品，操作簡便，提取后樣品中雜質干擾少，各藥物的萃取回收率高，均在75%以上，且通過有機溶劑的提取和濃縮，測定的靈敏度進一步提高。由于乙酸乙酯比重較輕，與血漿混合后不易乳化，且液面處于上層，所以實驗操作更方便。在進行流動相條件篩選時，考察不同配比的分離效果，發現在甲醇：水﹙65:35﹚時，各色譜峰及內標間分離效果好，且峰形尖銳，柱效高，完成一次測定只需15min。㏎選擇230nm波長是經過分析發現目標成分在230nm紫外吸收系數均比較大，可以提高靈敏度。由于本方法流動相中無緩沖鹽和改性試劑，因此測試過程中平衡和沖洗色譜系統的時間比較短，有利于提高測定效果，更合適臨床應用。

　　3.藥物腹腔注射在家兔房水中的藥代動力學研究：

　　測定腹腔注射藥物后不同時間家兔房水中的質量濃度，計算其藥代動力學參數，研究藥代動力學特點。關于樣品的處理和流動相選擇，以甲醇處理樣品和選擇甲醇：水：磷酸緩沖液或甲醇：水為流動相的報道較多。也有選用高氯酸處理血樣和甲醇：水：冰醋酸為流動相的報道。我們采用高氯酸沉淀放水中的微量蛋白，一甲醇：水：冰醋酸=35:65:0.2為流動相，色譜柱為Diamonsil C18不銹鋼柱，在波長為250nm紫外光下對腹腔注射藥物量濃度的測定。通過高氯酸空白，防水空白和房水溶解藥物標準品對照測定，以及回收率測定為87.60％，日內RSD為4.0％，日間RSD為5.32％，無其他峰干擾。結果表明，本方法具有特異，靈敏，快速等優點，使用于對房水藥物質量濃度的測量。

　　反相液相色譜法測定玻璃體腔內N質量濃度

　　4.藥物在玻璃體內注射的藥代動力學研究：

　　取玻璃體樣品，用反相液相色譜法測定玻璃體腔內N質量濃度。用DAS軟件計算主要的藥代動力學參數。

　　增殖性玻璃體視網膜病變的治療主要是通過手術促使增生性病變的視網膜復位，但仍有10％左右的患者術后發生增殖性玻璃體視網病變。因為玻璃體手術雖然能切除已形成的增生膜，但不能*取出增生細胞，甚至會刺激細胞分化，增生，又形成增殖性玻璃體視網膜病變。所以，藥物防治增殖性玻璃體視網膜病變是非常必要的。近年來多種抗細胞增生藥或抗炎藥防治增生性玻璃體視網膜病變的實驗研究取得了一些進展，主要有抗腫瘤，抗過敏，降血壓，酪氨酸激酶抑制劑等，但是目前在臨床上仍無理想藥物可供使用。