EPI300 電擊感受態細胞 50ul*20-生命科學儀器 返回列表頁

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培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15小時。

shēng huà shì jì 微量可調移液器P2 容量： 保存：-20℃ 100毫克

shēng huà shì jì 微量可調移液器P1000 容量： 25克

shēng huà shì jì 微量可調移液器P100 容量： 保存：-20℃ 1克

shēng huà shì jì 微量可調移液器P10 容量： 保存：-20℃ 1克

shēng huà shì jì 微量可調八道移液器P50 容量： 保存：-20℃ 1克

shēng huà shì jì 微量可調八道移液器P300 容量： 保存：-20℃ 250毫克

shēng huà shì jì 微量可調八道移液器P10 容量： 2～8℃ 1克

shēng huà shì jì 微孔濾膜（混纖） 容量： 保存：-20℃ 25毫克

shēng huà shì jì 微晶纖維素板 容量： 2～8℃ 1克

shēng huà shì jì 微晶纖維素 容量： 100克

shēng huà shì jì 網織紅細胞計數液 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 王樹脂 容量： 25克

shēng huà shì jì *培養基 容量： 2～8℃ 25毫升

shēng huà shì jì 彎曲菌血瓊脂基礎 容量： RT 支

EPI300 電擊感受態細胞 50ul*20shēng huà shì jì 唾液酸測試盒（帶SA標準） 容量

大鼠乙酰* 規格： 48T/96T

 ALDH 大鼠乙醛脫氫酶 規格： 48T/96T

 ADH 大鼠乙醇脫氫酶 規格： 48T/96T

 Glp-1 大鼠胰高血糖素樣肽1 規格： 48T/96T

 Amylin 大鼠胰淀素 規格： 48T/96T

 ICA 大鼠胰島細胞抗體 規格： 48T/96T

 IAA 大鼠胰島素自身抗體 規格： 48T/96T

 PI 大鼠胰島素原 規格： 48T/96T

 IGFBP-4 大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白4 規格： 48T/96T

 IGFBP-3 大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白3 規格： 48T/96T

 IGFBP-2 大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白2 規格： 48T/96T

 IGFBP-1 大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白1 規格： 48T/96T

 IGF-2 大鼠胰島素樣生長因子2 規格： 48T/96T

 IGF-1 大鼠胰島素樣生長因子1 規格： 48T/96T

 ISR-β 大鼠胰島素受體β 規格： 48T/96T

 INS 大鼠胰島素 規格： 48T/96T

 TAP 大鼠*原激活肽 規格： 48T/96T

： RT 個

注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態細胞為例。
2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇
 5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。