C肽放免試劑盒試驗方法及樣本要求

C肽放免試劑盒試驗原理、方法   

C-P 免放藥盒是一種固相“三明治”夾心式免疫放射量度分析，由兩株單克隆 抗體識別和分析。兩株單克隆抗體分別抗 C-P 分子相距很遠的兩個位點：株單 抗包被于試管底部內壁；第二株單抗用 125I 進行放射性標記，用作示蹤劑。存在于 標準品或待測樣品中的 C-P 分子被夾在兩株單抗之間。過量未結合的示蹤劑在洗滌 過程中容易地被除去，而抗體僅保留了被吸附的抗體-抗原-示蹤劑結合物。結合在 包被管上的放射活性的量與測定開始時存在的 C-P 的量成比例。

由于 C-P 極不穩定，溶解后需立即使用，其余溶液按每次使用量分裝后置-20℃可 儲存 3 個月，只能凍融一次，避免反復凍溶。

【適用儀器】 1、γ－計數器 2、振蕩器

【樣本要求】 110 微升人血清樣本。 采靜脈血 5ml 于塑料試管中，靜置使其凝固后，1500 轉／分離心，取其上清液， 放置玻璃瓶中。如果樣本不立即使用，可在-25℃~-18℃儲存 6 個月。

【試驗方法】

1、 將實驗所需試劑及樣本放置室溫，平衡至少 30 分鐘以上才可進行操作； 標準品用 1.0ml 去離子水溶解后輕輕搖勻，放置 10min 左右方可使用。

2、 打開包被試管包，取出包被管進行編號，所有實驗均做雙管重復；

3、 取每個濃度的標準品、質控血清和樣本 100µl 加入相應編號的試管中；

4、 每管均各加入 100µl 標記抗體液，室溫（17-27℃）振蕩 1 小時后，吸干 或倒出；

5、 每管均各加入 2ml 洗滌液后，吸干或倒出，再重復操作一遍此步驟；

6、 用 γ-計數器測定每管 1 分鐘的放射性強度計數；

7、 從標準曲線上讀取樣本及質控血清的濃度。