檢測(cè)人源細(xì)胞代謝活性的方法

檢測(cè)人源細(xì)胞的代謝活性也可以反映細(xì)胞增殖的情況。在細(xì)胞增殖過(guò)程中乳酸脫氫酶的活性會(huì)增加，而活性的脫氫酶可以使得外源性的四唑鹽或者阿爾瑪藍(lán)(Alamar blue)還原成為帶有顏色還原產(chǎn)物。通過(guò)分光光度計(jì)或者酶標(biāo)儀來(lái)讀取含染料培養(yǎng)基的吸光度，從而衡量細(xì)胞的代謝活性，檢測(cè)細(xì)胞增殖的情況。
四種zui常見(jiàn)的四唑鹽是：MTT、XTT、MTS和WST1，其還原產(chǎn)物為甲瓚(formazan)。
(1)四甲基偶氮唑鹽法(MTT)：MTT商品名為噻唑藍(lán)，是一種黃色的染料。1983年Mosmann建立MTT比色法，用于檢測(cè)細(xì)胞存活和增殖。其原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶，甲瓚并沉積在細(xì)胞中，而死亡的細(xì)胞無(wú)此功能。二甲亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫分析儀測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。MTT可以用于所有細(xì)胞類型，但MTT在標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)基中是不溶的，而且其生成的甲瓚晶體需要溶解在DMSC)中。因此，MTT主要作為終點(diǎn)檢測(cè)方法。另外，有研究發(fā)現(xiàn)過(guò)氧化物會(huì)降低MTT測(cè)定的準(zhǔn)確度，抑制將近95％，的MTT與O2-的反應(yīng)，MTT溶解產(chǎn)物甲瓚會(huì)吸附在納米纖維上，而致使檢測(cè)的結(jié)果呈現(xiàn)假陰性。
(2)二甲氧唑黃比色法(XTT)：XTT是一種與MTT類似的四唑氮衍生物，可被活細(xì)胞還原形成水溶性的橘黃色的甲瓚產(chǎn)物，不形成顆粒，可直接用酶聯(lián)免疫分析儀檢測(cè)吸光度，故較MTT法更加快速、簡(jiǎn)便、敏感。
但XTT水溶液不穩(wěn)定，需要低溫保存，現(xiàn)配現(xiàn)用。由于XTT的代謝產(chǎn)物呈橘黃色，故培養(yǎng)體系中有些黃色代謝物和試劑可能會(huì)影響其檢測(cè)結(jié)果。與MTT一樣，過(guò)氧化物可抑制近95％的XTT與O2-的反應(yīng)，故對(duì)XTT測(cè)定的準(zhǔn)確度有一定的影響。
(3)內(nèi)鹽法(MTS)：MTS是一種新型的MTT類似物。MTs在偶聯(lián)劑PMS存在的條件下，可被活細(xì)胞線粒體中的多種脫氫酶還原成水溶性的有色甲瓚產(chǎn)物，其顏色深淺與活細(xì)胞數(shù)量在一定范圍內(nèi)呈高度相關(guān)，可用酶標(biāo)儀檢測(cè)。它的優(yōu)點(diǎn)在于無(wú)放射性、快速、安全、方便、靈活及特異性強(qiáng)，同時(shí)又克服了MTT、XTT的缺點(diǎn)。
(4)四唑單鈉鹽法(WST-1)：WST-1是水溶性四唑鹽試劑，是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的甲瓚。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其他MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的甲瓚不是水溶性的，需要由特定的溶解液來(lái)溶解：而WST-1和XTT、MTS產(chǎn)生的甲瓚都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-1產(chǎn)生的甲瓚比XTT和MTS產(chǎn)生的甲瓚更易溶解。再次，WST-1比XTT和MTS更加穩(wěn)定，加入WST-1顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，使檢測(cè)時(shí)間更加靈活，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高。
(5)Cell countjn譬kit-8(CCK-8)：CCK-8試劑中含有WST-8。WST-8是近年新開(kāi)發(fā)的一種較WST-1更新的水溶性四唑鹽，檢測(cè)原理與WST-1類似，但較WST-1更穩(wěn)定，靈敏度更高，溶解性更強(qiáng)，更易于保存。CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)的靈敏度比MTT、XTT及MTS更高，尤其適合于懸浮細(xì)胞，高通量藥物篩選。CCK-8法細(xì)胞毒性低，細(xì)胞檢測(cè)后還可重復(fù)利用，具有更好的實(shí)用性，可替代MTT法，具有良好的應(yīng)用前景。
(6)阿爾瑪藍(lán)法：阿爾瑪藍(lán)檢測(cè)試劑為細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)提供了一種簡(jiǎn)便、快速、可靠、安全的方法。阿爾瑪藍(lán)在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無(wú)熒光性，而在還原狀態(tài)下轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，可以用普通分光光度計(jì)或熒光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，吸光度和熒光強(qiáng)度與活性細(xì)胞數(shù)成正比。阿爾瑪藍(lán)對(duì)細(xì)胞無(wú)毒、無(wú)害，不影響細(xì)胞代謝、細(xì)胞因子分泌、抗體合成等，可以對(duì)同一批細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。
MTT可以用于所有細(xì)胞類型，但MTT在標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)基中是不溶的，而且其生成的甲瓚晶體需要溶解在DMSO中。因此，MTT主要作為終點(diǎn)檢測(cè)方法。其他三種鹽與阿爾瑪藍(lán)一樣，都是可溶且無(wú)毒的。它們可以作為連續(xù)監(jiān)控手段來(lái)跟蹤人源細(xì)胞增殖的動(dòng)態(tài)改變。其中XTT的效率較低，需要添加額外的因子。而WST-1更靈敏有效，與其他鹽相比能夠更快顯色。阿爾瑪藍(lán)的靈敏度也很高，只要微孔板的孔中有100個(gè)細(xì)胞它就能夠檢測(cè)到。四唑鹽和阿爾瑪藍(lán)氧化還原染料能夠用于多種儀器和高通量研究，非常方便。
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    二十八烷醇    20mg/支    英文名稱    110899-200302    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    祖師麻甲素(*）    20mg/支    英文名稱    110900-200405    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    *    20mg/支    英文名稱    111501-200202    規(guī)格:
鑒別    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    大豆苷元    20mg/支    英文名稱    111502-200101    規(guī)格:
鑒別    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    芳樟醇    20mg/支    英文名稱    111503-200001    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    D-果糖    20mg/支    英文名稱    111504-200001    規(guī)格:
鑒別    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    L（＋）阿拉伯糖    20mg/支    英文名稱    111506-200001    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    蔗糖    20mg/支    英文名稱    111507-200001    規(guī)格:
人源細(xì)胞