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    腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)條件優(yōu)化

    時(shí)間:2018-1-22閱讀:129
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    腫瘤細(xì)胞和樹(shù)鼩原代腎上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)特性,發(fā)現(xiàn)樹(shù)鼩原代腎上皮細(xì)胞和 Vero 細(xì)胞在15 d 以內(nèi)可由對(duì)數(shù)生*至平臺(tái)期,并能在對(duì)數(shù)期維持一定的生長(zhǎng)活力,由此說(shuō)明樹(shù)鼩原代腎上皮細(xì)胞能夠充分滿足體外EV71 感染實(shí)驗(yàn)的條件。通過(guò) EV71 對(duì)樹(shù)鼩原代腎上皮細(xì)胞和 Vero 細(xì)胞感染 48 h 后的核酸以及培養(yǎng)上清病毒載量的測(cè)定,結(jié)果是在感染樹(shù)鼩原代腎上皮細(xì)胞的培養(yǎng)上清中能明顯檢測(cè)到了病毒的擴(kuò)增條帶,這和陽(yáng)性對(duì)照的 Vero細(xì)胞結(jié)果一致。 并且再測(cè)定兩種細(xì)胞培養(yǎng)上清中的病毒載量時(shí)發(fā)現(xiàn)沒(méi)有存在顯著性的差異,且都要明顯地高于 0 h 的洗液,初步確立了 EV71 能夠較好地感染樹(shù)鼩原代腎上皮細(xì)胞,并且病毒能夠在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制過(guò)程。 為了進(jìn)一步確定 EV71 在被感染細(xì)胞內(nèi)的感染和復(fù)制活動(dòng),本研究通過(guò) Western blot 和免疫熒光分別檢測(cè)了細(xì)胞內(nèi)的 EV71 病毒蛋白 VP1 和定位情況。 比較樹(shù)鼩原代腎上皮細(xì)胞和 Vero 細(xì)胞的結(jié)果,其能夠證明和 Vero 細(xì)胞一樣,在經(jīng) EV71 感染2 d后開(kāi)始,此后在不同時(shí)間段均能檢測(cè)到 VP1 蛋白的持續(xù)存在,這和免疫熒光的檢測(cè)結(jié)果相吻合,說(shuō)明EV71 在感染樹(shù)鼩原代腎上皮細(xì)胞后的 6 ~ 8 d 內(nèi)病毒可持續(xù)存在并活動(dòng)。

    通過(guò)本研究,我們成功分離并優(yōu)化了樹(shù)鼩原代腎上皮細(xì)胞的培養(yǎng)條件,得到較純且生長(zhǎng)狀態(tài)良好的原代腎上皮細(xì)胞,進(jìn)而成功建立了 EV71 的樹(shù)鼩體外細(xì)胞感染模型。 在進(jìn)行樹(shù)鼩的原代腎上皮細(xì)胞感染后,通過(guò)系統(tǒng)地評(píng)價(jià)其感染特性,根據(jù)被感染細(xì)胞中病毒的核酸和蛋白層面檢測(cè)結(jié)果,均能夠證明 EV71 可以感染樹(shù)鼩體外的原代腎上皮細(xì)胞,其特征和腫瘤細(xì)胞相符。 以上這些研究成果能夠?yàn)楹罄^進(jìn)一步深入的研究 EV71 的體外感染機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 同時(shí),EV71對(duì)樹(shù)鼩體外感染模型的建立為將來(lái)細(xì)胞層面的藥物篩選提供了平臺(tái),進(jìn)而也為樹(shù)鼩活體感染模型的研究提供必要的依據(jù)。
    HPLC≥98%    trigonelline    胡蘆巴堿    20mg/支
    HPLC≥98%    Daphnetin    *(祖師麻甲素)    20mg/支
    HPLC≥98%    parthenolide    小白菊內(nèi)酯    20mg/支
    HPLC≥98%    Polyphyllin A        20mg/支
    HPLC≥98%    Polyphyllin B    重樓皂甙B    20mg/支
    HPLC≥98%    Polyphyllin C    重樓皂甙C    20mg/支
    HPLC≥98%    Polyphyllin E    重樓皂甙E    20mg/支
    HPLC≥98%    Polyphyllin F    重樓皂甙F    20mg/支
    HPLC≥98%        烏金甙    20mg/支
    HPLC≥98%        獐牙菜甙    20mg/支
    腫瘤細(xì)胞

     

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