胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)方法

胚胎成纖維細(xì)胞介紹

胚胎干細(xì)胞（Embryonic Stem Cell，ESC）是由囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（InnerCellMass，ICM）分離培養(yǎng)的具有分化特性的細(xì)胞，具有*自我增殖、自我更新和多向分化的潛能，能夠再生出各種功能細(xì)胞和組織器官。體外培養(yǎng)ESC的基本原則是在促進(jìn)ESC增殖的同時(shí)，維持其未分化的二倍體狀態(tài)，保持其向三個(gè)胚層細(xì)胞分化的潛能。ESC體外培養(yǎng)主要采用飼養(yǎng)層培養(yǎng)法，目前使用zui普遍的飼養(yǎng)層細(xì)胞有小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（Mouse Embryonic Fibroblast，MEF）及小鼠成纖維細(xì)胞無(wú)限系（STO）細(xì)胞。MEF作為飼養(yǎng)層培養(yǎng)ESC是一種zui常用的方法，它能有效地促進(jìn)ESC的增殖并維持其未分化性和多潛能性，可用于大多數(shù)動(dòng)物ESC的分離，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室均采用該細(xì)胞。

細(xì)胞特性

1)來(lái)源：取13.5d、14.5d的孕鼠昆明小鼠或者C57BL/6小鼠

2)含量：>5x105個(gè)/mL

3)鑒定：Vimentin與Keratin蛋白免疫熒光染色法

4)純度：>85%

5)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

6)規(guī)格：1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存： 1mL凍存管干冰運(yùn)輸。

胚胎成纖維細(xì)胞使用：僅供科研使用。

細(xì)胞培養(yǎng)方法

1）*培養(yǎng)基：小鼠胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基

2）培養(yǎng)方式：成纖維樣細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)

注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們。

2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶(hù)收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.胚胎成纖維細(xì)胞所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。