細(xì)胞免疫熒光簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)步驟

細(xì)胞免疫熒光簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)步驟如下:

1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小時(shí).

2.-20度甲醇固定20分鐘后,自然、干燥 10分鐘

3.PBS洗凈:3min*3

4.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS

5.PBS洗凈:2*5min

6.羊血清封閉：37度，20分鐘

7.一抗，4度過(guò)夜，一般要大于18小時(shí)或者37度 1-2小時(shí)

8.4度 PBS洗凈，3min*5次

9.二抗 37度小于一小時(shí)

10.37度 PBS洗凈，3*5min

涼干封片(封閉液PH8.5)

不管采用何種方法，在使用PBS緩沖液漂洗時(shí)，都要漂洗干凈并且要測(cè)下pH值，可以使用PBS多清洗幾次，也可以延長(zhǎng)PBS清洗時(shí)間，如果結(jié)果背景較高可以延長(zhǎng)漂洗的次數(shù)和時(shí)間。