配制人源細(xì)胞的基本要素

當(dāng)重要的人源細(xì)胞培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過(guò)濾器。
        高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如*和抗霉菌素如泰樂(lè)菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。
        ①在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
        ②分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，*推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
        ③每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。
        ④確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代。
        ⑤在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
        ⑥重復(fù)步驟4。
        ⑦人源細(xì)胞在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代，確定污染是否以已被消除。
67-56-1     Methyl Alcohol     甲醇標(biāo)準(zhǔn)品    3x1.5ml
111-42-2    Diethanolamine    二乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品    3ml
102-71-6         三乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品    3ml
        曲沃前列素標(biāo)準(zhǔn)品    3ml
        帕立骨化醇溶液標(biāo)準(zhǔn)品    3ml
134-62-3    Diethyltoluamide    避蚊胺標(biāo)準(zhǔn)品    3g
8031-42-3    Digitalis    洋地黃標(biāo)準(zhǔn)品    3g
67-68-5    Dimethyl Sulfoxide    二甲基亞砜標(biāo)準(zhǔn)品    3g
868-14-4     Potassium Bitartrate (AS)    酒石酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)品    3g
144-55-8     Sodium Bicarbonate (AS)    *標(biāo)準(zhǔn)品    3g
100986-89-8        左*相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品    35mg
人源細(xì)胞