人源細(xì)胞傳代方法

1.從培養(yǎng)容器中吸出用過的人源細(xì)胞并丟棄；

2.用不含鈣、鎂的*沖洗細(xì)胞（每10cm2培養(yǎng)表面積約2mL溶液）；從與貼壁細(xì)胞層相對(duì)的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液，以避免攪動(dòng)細(xì)胞層，前后搖晃容器數(shù)次（注：沖洗步驟可去除可能抑制解離劑作用的少量血清、鈣和鎂）；

3.從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入預(yù)熱的解離劑；試劑量應(yīng)足以覆蓋細(xì)胞層(每10cm2大約0.5mL)；

4.輕輕搖晃容器，使試劑*覆蓋細(xì)胞層；吸出多余解離試劑，T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶留200ul左右即可；

5.將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約2分鐘（請(qǐng)注意實(shí)際孵育時(shí)間根據(jù)所用細(xì)胞系不同而有所差異）；

6.在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況；如果解離程度未達(dá)90%，可將孵育時(shí)間延長(zhǎng)幾分鐘，每30秒鐘檢查一次解離情況；也可輕輕拍打培養(yǎng)容器以加快細(xì)胞解離；

7.細(xì)胞解離程度大于等于90%時(shí)，傾斜培養(yǎng)容器，使細(xì)胞上液體盡快流盡；加入所用解離劑兩倍體積的預(yù)熱*生長(zhǎng)培養(yǎng)基；吹打細(xì)胞層表面數(shù)次，使培養(yǎng)基分散；

8.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15mL無菌離心管中，以200×g的離心力離心3-5分鐘（請(qǐng)注意離心速度和時(shí)間依細(xì)胞種類不同而有所差異）；

9.用zui少體積的預(yù)熱*生長(zhǎng)培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將人源細(xì)胞懸液按照推薦比例稀釋，并將適量體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng)容器中，把細(xì)胞放回培養(yǎng)箱（注：如果使用培養(yǎng)瓶，將其放入培養(yǎng)箱前應(yīng)將瓶蓋旋松，以便進(jìn)行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋）。
20mg/支    42553-65-1    Crocin    西紅花苷
20mg/支    94238-00-3    Crocin I    西紅花苷I
20mg/支    55750-84-0    Crocin II    西紅花苷II
20mg/支    480-16-0；654055-01-3    Morin hydrate    桑色素
20mg/支    77-95-2    D-(−)-Quinic acid    D-(-)-奎寧酸
20mg/支    2415-24-9    Catalpol    梓醇
20mg/支    60-81-1    Phlorizin    根皮苷
20mg/支    5289-74-7    Ecdysterone    蛻皮激素
20mg/支    23513-14-6    6-gingerol    6-姜酚
20mg/支    4431-01-0; 81944-09-4    Ligustilide    蒿本內(nèi)酯
5mg/支    19130-96-2    1-Deoxynojirimycin    脫氧野尻霉素
20mg/支    546-43-0    Alantolactone    土木香內(nèi)酯
人源細(xì)胞