如何分離和培養ATCC細胞？

ATCC細胞的原代培養與正常細胞的原代培養的條件基本相似。一般常用腫瘤原代細胞培養基礎培養基、5～10%血清濃度、細胞培養添加劑、抗生素等等即可。或在原代培養時需加入原代細胞培養的特制添加物，或原患者血清（1~2%）以利細胞生長。用細胞生長因子如胰島素、雌激素等等。也可以考慮動物媒介培養。

根據細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子。腫瘤組織分離為腫瘤細胞原代培養的方法主要有組織塊法、酶消化法、鉭網法、脫落細胞法等。

1、組織塊法

將取得的瘤組織去除脂肪、結締組織及壞死部分，在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎組織，切成1~2mm3小塊，接種于培養瓶（或皿）中，370C、5%CO2或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養。

2、酶消化法

在剪碎組織，切成1~2mm3小塊中，加入0.25%*或2000U/ml膠原酶，在370C水浴中消化30min或更長一些，去除消化液，用洗液洗3次，培養基洗1次后，用*培養基懸浮，并用吸管吹打分散制成細胞懸液，計數。以（5~10）x108個/L細胞濃度，在專業性原代腫瘤細胞*培養體系中，370C、5% CO2下分瓶（或皿）中培養。

3、鉭網法

在一張面積約為1cm2的鉭網上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊（1~2mm3大?。?，用鑷子輕壓，使其粘于網上，再把鉭網放入培養皿中，使網下的組織塊與皿壁緊緊接觸， 在專業性原代腫瘤細胞*培養體系中，于370C、5% CO2下培養，每隔2~3天換液一次，5天后可見細胞從網上移出，并能在相當于腫瘤*位形成純凈的單層腫瘤細胞。

4、脫落細胞法

將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結締組織后，洗液洗2次，用刀片將腫瘤組織切成細薄片，在切割的同時有許多腫瘤細胞脫落下來，脫落細胞經洗滌后，加入*培養基，便可獲得較純的上層細胞在專業性原代腫瘤細胞*培養體系中，于培養瓶（或皿）中，370C、5% CO2下培養，每隔2-3天換液一次，7-10天腫瘤細胞逐漸長成單層。

zui后，小編提示您一定要記?。?/p>

1、ATCC細胞全程操作和周圍環節一定要嚴格無菌，污染可能伴隨原代細胞分離、培養、凍存、復蘇、運輸等的某一環節或整個環節中，污染一定是原代細胞培養失敗的*問題。

2、一定要用專業性、配套的原代細胞*培養體系。在原代細胞分離和*代原代細胞培養用的原代細胞培養體系是該品種原代細胞培養的原代細胞培養體系。
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ATCC細胞