培養(yǎng)人源細(xì)胞的凍存的分析

人源細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中，儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。 
1． 凍存細(xì)胞 
（1）選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無(wú)支原體污染)，在凍存前1d換液。 
（2）按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液，計(jì)數(shù)，使細(xì)胞密度達(dá)5×10 7 ／ml左右密度，離心，去上清。 
（3）加入配制好的凍存液（培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點(diǎn)降低，使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。 
（4）分裝于無(wú)菌凍存管中，每管加1.5m懸液。 
（5）旋好凍存管并仔細(xì)檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記。 
（6）凍存：在特殊的 儀器 或簡(jiǎn)易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時(shí)間內(nèi)，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過(guò)快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促進(jìn)冰晶形成。 
操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套，以免液氮凍傷。 細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中，儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。 
1． 凍存細(xì)胞 
（1）選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無(wú)支原體污染)，在凍存前1d換液。 
（2）按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液，計(jì)數(shù)，使細(xì)胞密度達(dá)5×10 7 ／ml左右密度，離心，去上清。 
（3）加入配制好的凍存液（培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點(diǎn)降低，使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。 
（4）分裝于無(wú)菌凍存管中，每管加1.5m懸液。 
（5）旋好凍存管并仔細(xì)檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記。 
（6）凍存：在特殊的 儀器 或簡(jiǎn)易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時(shí)間內(nèi)，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過(guò)快能影響人源細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促進(jìn)冰晶形成。 
操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套，以免液氮凍傷。 
小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(lèi)(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)(MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA Kit    ELISA.    96T/48T
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
小鼠腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
人源細(xì)胞