干細(xì)胞解凍培養(yǎng)技巧分析

說(shuō)明
1.經(jīng)過(guò)冷凍保存后的干細(xì)胞，其生存率會(huì)下降，冷凍時(shí)之冷卻速度，保存溫度，解凍時(shí)升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類(lèi)、濃度等都可影響細(xì)胞存活率。
2. 一般而言，４℃以下慢慢地冷凍，保存于液態(tài)氮中（-196℃）。
3. 37℃快速解凍。
4.保護(hù)劑（抗凍劑）：添加甘油 （glycerol） （ I0 %左右 ） 或dimethy1sulfoxide （DMSO） （ 5- 10% ） 。
5.有些細(xì)胞如果采用上述的方法時(shí)，無(wú)法得到高的存活率。此時(shí)，則必需考慮可能傷害細(xì)胞的機(jī)制，添加劑之作用等而來(lái)找出適當(dāng)?shù)臈l件來(lái)修正。

材料 :
1.增殖期之細(xì)胞 （9成滿(mǎn)），培養(yǎng)于培養(yǎng)皿中數(shù)個(gè)。
2.冷凍用培養(yǎng)基（2倍） : 培養(yǎng)基內(nèi)加入三倍血清及15% DMSO，保存在冰箱中。
3. 冷凍管、保利龍制容器、鋁制ample支持棒。

步驟:
1.準(zhǔn)備2 x 107cells/ml的干細(xì)胞懸浮液。
2.冷凍用培養(yǎng)基（2倍） :以微溫水溶解DMSO，在培養(yǎng)基中混合為15% （v/v）。這是DMSO的二倍濃度之溶液。必須在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前在行配制，配好后放在冰箱中，使用量必須和細(xì)胞懸浮液的量相等；使用時(shí)維持在4℃。
3.分裝: 在冷凍管管中分別加0.5ml （1/2冷凍管體積）冷凍用培養(yǎng)基（2倍）及2 x 10（7次方）cells/ml的細(xì)胞懸浮液；等量混合。將蓋子扭緊后，在管中部貼上膠帶密封。
4.記載卷標(biāo) : 用抗凍marker pen在冷凍管上寫(xiě)明細(xì)胞名稱(chēng)、代數(shù)、冷凍的年，月，日等所需要的項(xiàng)目。
5.放進(jìn)冷卻的保利龍容器中，而在- 80℃的超低溫槽中放置一個(gè)晚上。
6.干細(xì)胞放進(jìn)液態(tài)氮容器中及保存 : 在支持棒上裝上冷凍管，迅速地放進(jìn)容器內(nèi)。