分析干細(xì)胞周期的操作步驟

Ⅰ、干細(xì)胞樣品準(zhǔn)備

準(zhǔn)備以下一種或幾種樣品

A、組織單細(xì)胞懸浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盤細(xì)胞)

B、組織培養(yǎng)細(xì)胞

C、Ficoll-hypaque分離的單核細(xì)胞

Ⅱ、干細(xì)胞反應(yīng)體系-DNA低滲緩沖液

檸檬酸三鈉 0.25g Triton-X 100 0.75ml Propidium iodide 0.025g

核糖核酸酶 0.005g

蒸餾水 250ml

我們將該DNA低滲溶液于密閉瓶子中存放數(shù)月后并無發(fā)現(xiàn)有任何染色活性的丟失

Ⅲ、染色

1、 每一個管子中放入1×106個細(xì)胞;

2、 樣品離心后盡可能*地移去上清液，并且不要打碎沉淀塊;

3、 入1ml的DNA低滲染色緩沖液至沉淀中，并混勻;

4、 樣品于4℃下避光30分鐘或zui長不超過1個小時以備流式干細(xì)胞儀分析。