一、挑選試劑
挑選質量優良的檢測試劑，嚴格依照試劑闡明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。二、加樣
可能原因：
1）血清或血漿標本別離欠好即進行加樣； 2）手藝操作中，加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等候時刻過長(特別是室內溫度較高時)； 3）加完標本再加酶試劑時酶濺起孔外。
解決辦法：
1） 標本為血清：將血液先天然寄存1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須運用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須當即倒置*混合5-10次，放置一段時刻后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要儲存，則置于-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板外表輕拭吸干。 4) 如果選用AT或其他全自動加樣，挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時，請分批操作。
三、 孵育
可能原因：
1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸騰，吸附于孔壁，難于清洗*； 2) 孵育時刻人為延長，導致非特異性結合緊附于反響孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：
1) 貼封片或加蓋； 2) 按闡明步驟嚴格控制操作時刻。
四、洗板
可能原因：
1) 選用手藝洗板，孔與孔之間液體穿插。 2) 選用半自動洗板機洗板時，洗液量缺乏，導致洗板不*；洗板針阻塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。 3) 反響板過多形成洗板等候時刻長。
解決辦法：
1) 確保洗液注滿各孔，洗板針疏通，洗完板后在吸水紙（挑選潔凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。
五、顯色
可能原因：
1) 顯色劑制造后放置時刻過長或運用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺起孔外形成液體回流。
解決辦法：
1) 顯色劑盡量在臨用前制造，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時堅持顯色劑不外流； 3) A、B液應防止觸摸金屬器械。
六、停止
可能原因如加停止液時發生較多氣泡，導致假陽性添加。所以在加停止液時應防止發生氣泡。
ELISA實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的使用，但操作中的各個環節對實驗的檢測效果影響較大，如不留意，有可能導致顯色不全、花板等成果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟示，進步實驗質量。下面剖析ELISA實驗操作中可能影響成果的原因，并給出相應的解決辦法。
