在ELISA試劑盒曲線的低濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部分可以用直線方程，中心部分可用對數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù)。免疫檢測時規(guī)范點（可所以倍比稀釋的，也可以不是）濃度假設(shè)和相應(yīng)的吸光度（OD）值假設(shè)可以出現(xiàn)直線當(dāng)然是zui抱負(fù)的了，這時可以經(jīng)過EXELL等利便的取得擬合曲線，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。
ELISA試劑盒關(guān)于規(guī)范曲線的擬合辦法，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于ELISA試劑盒及其它生物學(xué)反響中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部分，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中心一段，而Logistic曲線則對曲線的悉數(shù)都有較好的合用性。在一個長的區(qū)間內(nèi)，Logistic應(yīng)該都能擬合得較為抱負(fù)。假設(shè)用來定量，S形曲線的中心段（較陡處）是比較好的，而兩真?zhèn)€平整部分計算誤差會大，有時甚至?xí)艽蟆Ｓ糜诿庖邫z測的所謂“規(guī)范曲線”真實稱為擬合曲線比較適宜。目前上zui盛行的免疫檢測擬合辦法是“四參數(shù)邏輯擬合”，用這種擬合辦法往往可以比較的反映濃度和吸光度的曲線，然后進(jìn)一步比較的取得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候可以有這么抱負(fù)的狀況，標(biāo)品濃度和相應(yīng)OD值往往是"S"型的曲線，這時就不能用直線擬合的辦法了，而對擬合辦法進(jìn)行選擇就是必要的了。紐帶在于你的規(guī)范曲線做到了S形的哪一部分，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部分。當(dāng)然，假設(shè)用于定量，仍是在中心一段較好。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。
ELISA試劑盒這些辦法固然沒有一種辦法可以通用，但也都可以用。但并不是說它就是的。事實上不僅是ELISA試劑盒，其它良多生物學(xué)反響都是S形曲線，也都可以用Logistic曲線擬合。
1、樣品的濃度等目標(biāo)是依據(jù)規(guī)范曲線計算出來的，所以首要要把做規(guī)范曲線看作是比做正式試驗還要重要的一件事，不然后邊的試驗成果無從談起。
2、設(shè)置規(guī)范曲線樣品的規(guī)范濃度規(guī)模要有一個比較大的跨度，而且要能包含你所要檢測試驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在規(guī)范曲線濃度規(guī)模之內(nèi)，包含上限和下限。而關(guān)于呈S型的規(guī)范曲線，盡量要使試驗樣品的濃度在中心斜度zui陡段，即曲線簡直成直線的規(guī)模內(nèi)。
3、選用倍比稀釋法制造規(guī)范曲線中的規(guī)范樣品濃度，這樣就可以確保規(guī)范樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的違背。
4、檢測規(guī)范樣品時，應(yīng)按濃度遞加次序進(jìn)行，以削減高濃度對低濃度的影響，進(jìn)步性。
5、規(guī)范曲線的樣品數(shù)一般為7個點，但至少要確保有5個點。
