ELISA試劑盒在試驗條件（包含試劑）較難確保穩定的情況下，這種判別法較為適宜。在得出標本（S）和陰性對照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性（positive），而是?。╬atient）的縮寫，不該誤解。為防止混淆，更宜用S/N表明。在前期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽性規范，現多為各種測定所沿襲。
實際上每一測定體系應該用試驗求出各自的S/N的閾值。更應留意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液，致使反響后發生的本底可能較正常人血清的本底低得多。陽性斷定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數，以此作為判別成果陽性或陰性的規范。ELISA試劑盒用此法判別成果要求試驗條件非常穩定，陽性和陰性的對照品應契合必定的標準，須配用精密的儀器，并嚴厲按規則操作。陽性斷定值公式中的常數是在這特定的體系中經過對很多標本的試驗檢測而得到的。
ELISA試劑盒現舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血漿，陽性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng/ml。每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先核算陰性對照A值的平均數（NCX）和陽性對照A值的平均數（PCX），兩個平均數的差（P-N）必須大于一個特定的數值（例0.400），試驗才有效。3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規模，則棄去，罷了另兩個陰性對照重新核算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上規模，則該次試驗無效。
ELISA試劑盒陽性斷定值按下式核算：
陽性斷定值=NCX+0.05 標本A值＞陽性斷定值的為陽性，小于陽性斷定值的為陰性。應留意的是，式中0.05為該試劑盒的常數，只適合于該特定條件下，ELISA試劑盒而不是對各種試劑均可通用。
