ELISA試劑盒常用的鹽析劑是硫酸銨，其溶解度大、價(jià)格便宜。硫酸銨沉積蛋白質(zhì)的才能很強(qiáng)，其飽和溶液能使大多數(shù)的蛋白質(zhì)沉積下來(lái)。對(duì)酶沒(méi)有損壞效果。
pH的操控：應(yīng)從酶的溶解度與安穩(wěn)性兩個(gè)方面思考，在酶等電點(diǎn)時(shí)其溶解度zui小易沉積，但有些酶再等電點(diǎn)時(shí)安穩(wěn)性較差，因此要挑選pH值.通常請(qǐng)求在酶zui安穩(wěn)的pH值的前提下再思考酶沉積的pH值。在操作中一旦斷定pH值后，在增加硫酸銨之前甲酸或堿調(diào)理好酶液的pH值，要盡量避免溶液pH值的波動(dòng)避免損壞酶的安穩(wěn)性。在增加硫酸銨時(shí)要留意拌和，并留意硫酸銨的參加速度，通常是由少到多，緩慢參加，硫酸銨盡可能磨成細(xì)粉。
溫度的操控：有些酶在較高溫度下安穩(wěn)性能較好，可在常溫下進(jìn)行鹽析操作，而對(duì)于大多數(shù)酶，盡可能在低溫下操作。
酶液的凈置：加完硫酸銨后，酶液要靜置一段時(shí)間，使酶蛋白*沉積下來(lái)，酶靜置后，就不要再加以拌和。
有機(jī)溶劑挑選：可用于酶蛋白沉積的有機(jī)溶劑包含醇類物質(zhì)等，如甲醇、乙醇、異丙醇。乙醇的親水性能較好，可防止蛋白質(zhì)的變性，酶蛋白在其間的溶解度也較低。
有機(jī)溶劑沉積操作：有機(jī)溶劑通常都使蛋白質(zhì)變性，當(dāng)溫度較高時(shí)變性蛋白質(zhì)分子就會(huì)成為持久失活。因此用有機(jī)溶劑處理時(shí)在0℃以下進(jìn)行。用有機(jī)溶劑沉積得到的酶蛋白不要放置過(guò)久，要趕快加水溶解。
聚合物絮凝劑沉積 聚合物絮凝劑，如葡聚糖和聚乙二醇，與酶分子搶奪水分子，具有脫水效果使酶沉積。聚乙二醇作為一種沉積劑的長(zhǎng)處是在水溶液中，其濃度可到達(dá)50%，濃度為6%-12%的蛋白質(zhì)大都能夠沉積下來(lái)。這種試劑不需要低溫操作，而且對(duì)蛋白質(zhì)的安穩(wěn)還有必定的維護(hù)效果。聚乙二醇不會(huì)被吸附，故在離子交換吸附前不必去掉。
酶和別的蛋白質(zhì)都會(huì)構(gòu)成金屬鹽，其溶解度較低。用金屬離子沉積的缺陷是酶與金屬離子相互效果后，可逆改變較差，尤其是用巰基衍生物，它的]金屬離子會(huì)催化酶變性而失活。
用*可挑選性去掉核酸，從而使胞內(nèi)酶沉積出來(lái)。*鹽（濃度為0.5-1.0mg/mg蛋白質(zhì)）對(duì)于挑選性沉積核酸的效果比錳離子還要好，酶不易失活。
在蛋白質(zhì)純化進(jìn)程中首要用到的膜別離技術(shù)多為超濾。在靜壓效果降低溶液經(jīng)過(guò)孔徑十分小的濾膜，使溶液中分子量較小的溶質(zhì)透過(guò)薄膜，而大分子被截留于膜表面。大多數(shù)超濾膜是由一層十分薄的功用膜與較厚的支持膜在一起而構(gòu)成的。功用膜決定了膜的孔徑，而支持膜供給機(jī)械強(qiáng)度以反抗靜壓力。超濾濃縮的長(zhǎng)處是：操作條件溫文，無(wú)相改變，對(duì)生物活性物質(zhì)沒(méi)有損壞。
超濾體系首要由料液貯罐、泵、超濾器、透過(guò)液搜集罐構(gòu)成，料液經(jīng)泵打入超濾器，水及低分子量物質(zhì)排出超濾器外，被濃縮的料液在料液貯罐、泵、及超濾器中循環(huán)。當(dāng)料液濃縮至必定的倍數(shù)后即可作為進(jìn)一步處理的濃縮料液。
ELISA試劑盒超濾應(yīng)用于蛋白質(zhì)類物質(zhì)的濃縮和脫鹽進(jìn)程中時(shí)應(yīng)留意以下疑問(wèn)：，在超濾循環(huán)進(jìn)程中，因?yàn)楸煤腿~輪與料液的摩擦放熱效果，料液的溫度會(huì)逐步增加，會(huì)構(gòu)成蛋白質(zhì)分子的丟失。因此，料液貯罐應(yīng)加冷卻體系，并裝置主動(dòng)測(cè)溫及操控體系。第二，某些酶的輔助因子散失為疑問(wèn)：一些酶富含輔助因子，其分子量小，超濾時(shí)易從透過(guò)液中排除去，因此在超濾前或超濾后要增加必定濃度的的輔助因子。
還可將超濾與親和層析相以進(jìn)步別離純度。其工作原理是：當(dāng)溶液中欲被別離的蛋白質(zhì)不受阻止地經(jīng)過(guò)超濾膜的孔隙時(shí)，如果在膜的一側(cè)著親和配基，該蛋白質(zhì)就會(huì)與配基因此結(jié)聚在膜的這一側(cè)。不與配基的別的物質(zhì)就將穿過(guò)孔而被帶走。再用適合的洗脫劑將該蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)，洗脫液用于進(jìn)一步的別離純化。
蛋白質(zhì)較易吸附與氣液界面，這有利于其構(gòu)造的安穩(wěn)。泡沫別離進(jìn)程是：蛋白質(zhì)從主體溶液中擴(kuò)散到氣液界面，該進(jìn)程可能是可逆的也可能是不可逆的；分子發(fā)作重排，通常以為在空氣-水界面會(huì)構(gòu)成兩種類型的膜，一種是稀膜，另一種是濃膜，可能會(huì)發(fā)作由多個(gè)分子集合在一起的景象。在氣液界面構(gòu)成的蛋白質(zhì)膜能夠是單層的也能夠是多層的。膜的類型取決于主體溶液及氣液界面上蛋白質(zhì)的特性、構(gòu)造和濃度。
ELISA試劑盒泡沫別離的意圖，一方面進(jìn)步酶蛋白的富集率（泡沫中蛋白質(zhì)的濃度/開(kāi)始溶液中蛋白質(zhì)濃度），另一方面進(jìn)步酶蛋白的提取率（泡沫中蛋白質(zhì)的提取率/開(kāi)始的蛋白質(zhì)質(zhì)量），或使多組分混合物中某一組分的分配系數(shù)zui大。
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