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    技術文章

    ELISA試劑盒試劑制造研討辦法

    閱讀:145發布時間:2017-11-13

    完整的ELISA試劑盒包括以下各組分:已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);酶標記的抗原或抗體(結合物);ELISA試劑盒酶的底物;陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參閱標準品和操控血清(定量測定中);酶聯物(結合物)及標本的稀釋液;洗刷液;酶反響終止液。ELISA中有三個必要的試劑:免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。
    ELISA試劑盒疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)枯燥的前提下一般可保存6個月以上。可作ELISA中載體的資料良多,zui常用的是聚苯乙烯。ELISA試劑盒以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,反響后用磁鐵的吸引進行分離,洗刷利便,ELISA試劑盒一般均配以特別儀器。為比較不同固相在某一ELISA測定中的好壞,可應用如下的實驗:用其他免疫學測定辦法選出一個典型的陽性標本和陰性標本,將它們進行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預訂的ELISA操縱進程進行測定,然后比較成果。小試管還能夠當作比色杯,ELISA試劑盒zui終直接放入分光光度計中比色。直接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大前進,因而含雜質較多的抗原也可選用捕捉包被法,實驗的特異性、敏感性均由此得以改進,重復性亦佳。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的機能,抗體或蛋白質抗原吸附其上后仍留存本來的免疫學活性,加之它的價格低廉,所以被遍及選用。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的作用力。操控反響前提,使各孔讀數在吸光度0.8左右。一切單個讀數與悉數讀數的均數之差,應小于10%。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,而遍及的固相載體一般不能直接與核酸結合。ELISA板的特色是能夠一起進行大量標本的檢測,并可在特制的比色計上迅速讀出成果。換言之,包被等于抗原或抗體結合到固相載體外表的進程。在哪一種載體上陽性成果與陰性成果差別zui大,這種載體就是這一ELISA測定項目的zui合適的固相載體。
    ELISA載體的外形主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。杰出的ELISA板應該是吸附機能好,空缺值低,孔底透明度高,ELISA試劑盒各板之間、統一板各孔之間、統一板各孔之間機能相近。再者,球型小珠的外表弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結合位點的暴出面處于反響狀況,因而珠式ELISA的反響往往更為靈敏。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯結多發生在Fc段上,抗體結合點露出于外,因而抗體的包被一般均選用直接吸附法。 
    ELISA試劑盒小試管作為固相載體也有較大的吸附外表,并且標本的反響量也相應添加。在ELISA中,用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,外表經磨砂處理后吸附面積大大添加。當抗原決定簇存在于或臨近于疏水區域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充沛露出,在這種情況下,直接包被作用欠安,能夠選用直接的捕捉包被法,ELISA試劑盒即先將針對該抗原的特異抗體作預包被,這以后經過抗原抗體反響使抗原固相化。ELISA試劑盒聚氯乙烯對蛋白質的吸附機能比聚苯乙烯高,但空缺值也略高。固相載體先用堿性蛋白質,如聚賴氨酸、*等作預包被,也可前進核酸的結協力。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯的特色為質軟板薄,可剪割,價廉,但光潔度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平坦。

     


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