ELISA試劑盒在酶聯固相免疫試驗中，尤其在簡介ELISA法中，經常會碰到陰性本底的問題。主要是本底過高和不同標本的本底值差異較大。本底或稱布景，是ELISA中的非特異性顯色。底物未經過酶效果而呈現的色彩稱為空白。底物液如制造不當會呈現必定的空白值。這個空白值只需不太高（A＜0.05），可從個測定值中減除，并不影響試驗成果。這兒研討的是不含待測抗原或抗體的陰性標本在ELISA中呈現的本底。從理論上講，只有陽性標本終究才能引出顯色反響，在以下狀況會呈現本底。
固相載體的吸附
在酶免疫測定中，ELISA試劑盒的特點是使用固相載體作為分離游離和結合的酶結合物的手法。固相載體與吸附在其上的抗原會抗體構成固相抗原或固相抗體，即免疫吸附劑（Immu-nosorbent）。一般所用的固相載體聚苯乙烯其外表主要是疏水基團，經過疏水鍵與蛋白質結合。之中吸附式物理性的非特異性吸附，盡管蛋白質的分子量、等電點、濃度等對吸附的量有必定的影響，但總的來說各種蛋白質均能吸附在聚苯乙烯載體的外表。因而除在包被時有目的地使抗原或抗體吸附在載體上，在ELISA各個過程中均有可能發生攪擾物質的吸附，使終究發生與受檢抗原-抗體反響無關的顯色，這是構成本底的主要原因。
