Q1: 為什么噬菌體在搖瓶階段沒有被發(fā)現(xiàn)？

回復(fù)：在搖瓶階段，一般不會往搖瓶里面通氣。因此在搖瓶階段染噬菌體的幾率比較少。如果經(jīng)過長時間培養(yǎng)后，空氣中存在大量噬菌體，Z終也會導致?lián)u瓶培養(yǎng)發(fā)生污染，這時需要對搖床內(nèi)部做熏蒸等滅菌措施。

 Q2: 大腸桿菌發(fā)酵過程中,出現(xiàn)一定的自溶情況,鏡檢有空泡現(xiàn)象。但是平板檢測，無噬菌斑出現(xiàn)。請問這是什么原因造成的?

回復(fù)：自溶情況是在培養(yǎng)哪個階段發(fā)生呢？如果出現(xiàn)在培養(yǎng)中期就發(fā)生自溶，有可能感染噬菌體。涂平板檢查是否有噬菌斑，應(yīng)該盡量采用雙層平板，效果較好。此外，在產(chǎn)物產(chǎn)量及其他發(fā)酵參數(shù)都正常情況下，是不是因為攪拌轉(zhuǎn)速較高，到對數(shù)后期后會有一部分菌體發(fā)生自溶現(xiàn)象。

 Q3: 如果是接種的超凈臺環(huán)境中有噬菌體,是不會進入種子搖瓶啊?

回復(fù)：會的，接種時超凈工作臺風是又上往下吹的，所以一般在超凈臺內(nèi)操作時，我們盡量減少瓶口敞開的時間，而且盡量將搖瓶斜放，減少超凈臺內(nèi)的氣體進入瓶內(nèi)。

 Q4: 想知道處理芽孢染菌時為什么需要用堿水處理發(fā)酵罐呢?

回復(fù)：根據(jù)過去做過的實驗，將分離出來的芽孢桿菌，分別在不同 pH 值培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)在酸性的環(huán)境里，芽孢桿菌能生長很好，而在堿性環(huán)境里卻無法生長; 此外，若罐體內(nèi)部存在一些結(jié)垢，經(jīng)過稀堿水處理后，結(jié)垢將變得松散，從而內(nèi)部芽孢桿菌也能夠釋放出來，便于滅菌殺死

 Q5:甲醇如何滅菌?

回復(fù)：純的甲醇一般不需要除菌，本身應(yīng)該無菌。如果是甲醇溶液，那需要除菌，但不是放滅菌鍋內(nèi)滅菌，而是過濾除菌。裝甲醇的補料瓶需要放入滅菌鍋滅菌，若擔心滅菌效果不好，可加水滅菌。過濾除菌時一定慎選過濾器種類，必須為抗有機溶劑，以避免過濾器在過濾過程中被甲醇腐蝕，一般采用PTFE，PP，PVDF，PES材質(zhì)都可以耐受甲醇。此外，甲醇過濾完也可以做無菌培養(yǎng)實驗。過程操作務(wù)必小心，一旦甲醇揮發(fā)會有毒性。

 Q6:請問芽孢桿菌消滅劑是什么？84消毒液可以嗎？

回復(fù)：當時使用的芽孢桿菌殺菌劑為諾福殺菌劑，內(nèi)含過氧化氫、活性膠質(zhì)銀離子等等；84消毒液主要成分是次氯酸鈉，效果有限，因此沒有前者好用。

 Q7: 補料瓶未連接前玻璃接頭接的是包扎的空氣過濾器嗎?

回復(fù)：補料瓶管線出來所連接的玻璃接頭為公頭，然后通過母頭和公頭連接兩邊管路。母頭的一端需加過濾器，若無過濾器，也可采用包扎的方式。除菌過濾器用錫箔紙包住，主要防止滅菌過程中有冷凝水浸濕過濾器，同時可以保證此處的滅菌溫度，棉花塞住不是太方便。

 Q8:罐內(nèi)死角不容忽視，發(fā)酵罐聯(lián)軸器形式，哪種死角比較少，螺絲用厭氧高溫密封膠涂抹可以嗎?

回復(fù)：進口發(fā)酵罐罐內(nèi)不會有死角，此概念在設(shè)計中已充分考慮。一般發(fā)酵罐采用直連驅(qū)動馬達，而細胞罐采用磁力驅(qū)動馬達。該兩種驅(qū)動軸設(shè)計上不會有死角，謹記使用過程中不要隨意卸載或晃動攪拌軸，導致密封圈密封性不佳即可。 您所提及的螺絲是罐蓋上面的嗎？在攪拌軸上的是可以涂抹，能否告訴我你要涂抹是的哪些螺絲？ 此外，密封膠質(zhì)量要有保證，不會在滅菌時進入罐內(nèi)影響菌體生長和產(chǎn)物純化

 Q9:芽孢桿菌及大腸桿菌在外觀大小上區(qū)別為何?

回復(fù)：以枯草芽孢桿菌為例，大小一般為0.7～0.8×2～3微米，芽孢大小一般為0.6～0.9×1.0～1.5微米；大腸桿菌大小一般為0.4～ 0.7×1 ～3微米。

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