新布尼亞病毒檢測試劑盒（熒光PCR法） 返回列表頁

服務流程：

公司產品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

反應五要素：

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

組成及試劑配制:

1、酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

PCR反應的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

雞α1抗胰糜蛋白酶(α1ACT) PE-Cy5.5標記的兔抗猴IgG

雞熱休克轉錄因子2(HSF2) PE-Cy7標記的兔抗猴IgG

雞c-myc癌因產物(c-myc) Cy3標記的兔抗猴IgG

雞大腦糖原磷酸化酶(PYGB)Cy5標記的兔抗猴IgG

雞轉錄激活因子-5(ATF-5) Cy5.5標記的兔抗猴IgG

雞蕈堿型酰膽堿受體亞型M1(M-AChRM1)Cy7標記的兔抗猴IgG

雞L1粘附分子(L1CAM/CD171) PE標記的兔抗猴IgG

雞Rho家族GTP酶1(RND1)PE-Cy3標記的兔抗猴IgG

雞粘蛋白3(MUC3)PE-CY5標記的兔抗猴IgG

雞胎盤蛋白14 (PP14)APC標記的兔抗猴IgG

雞角化內分泌因子(KAF)Alexa Fluor 350標記的兔抗猴IgG

雞轉鐵蛋白(TRF)Alexa Fluor 488標記的兔抗猴IgG

雞周期素D1(CCND1) Alexa Fluor 555標記的兔抗猴IgG

雞賴氨酰氧化酶樣蛋白4(LOXL4)PE-Cy5.5標記的兔抗猴IgM

雞多巴受體D3(D3R/DRD3)PE-Cy7標記的兔抗猴IgM

雞葡萄糖轉運蛋白4(GLUT4) Cy3標記的兔抗猴IgM
新布尼亞病毒檢測試劑盒（熒光PCR法）Mouse rabbit IgG/ Biotin  生物素化小鼠抗兔IgGNeuromedin C ≥97% (HPLC)

Mouse Goat IgG/ Biotin  生物素化小鼠抗羊IgG美拉諾坦 ≥95% (HPLC)

Mouse Goat IgM/ Biotin  生物素化小鼠抗羊IgMD-鳥氨酸鹽酸鹽 99%

Mouse human IgG/ Biotin  生物素化小鼠抗人IgGN'-Cbz-L-鳥氨酸 98%

Mouse human IgM/ Biotin  生物素化小鼠抗人IgML(+)-2,3-二氨氨酸鹽酸鹽 97%

Mouse rabbit IgM/ Biotin  生物素化小鼠抗兔IgML-鳥氨酸鹽酸鹽 98%

Rabbit bov IgG/Biotin  生物素化兔抗牛IgGN-叔丁氧羰-N'-芐氧羰-D-鳥氨酸  98%

Rabbit bov IgM/Biotin  生物素化兔抗牛IgMN-芴氧羰-(N'-1-(4,4-二-2,6-二氧代環己-1-亞))-L