Anti-GCAT抗體 返回列表頁

英文名稱   Anti-GCAT

中文名稱  氨基丙酮合成酶抗體

別    名  2 amino 3 ketobutyrate CoA ligase; 2 amino 3 ketobutyrate coenzyme A ligase, mitochondrial; 2-amino-3-ketobutyrate coenzyme A ligase; AKB ligase; Aminoacetone synthase; GCAT; Glycine acetyltransferase; glycine C acetyltransferase; glycine C acetyltransferase (2 amino 3 ketobutyrate coenzyme A ligase); KBL_HUMAN; KLB; mitochondrial.

濃 度：  1mg/1ml

規(guī) 格  0.2ml/200μg     

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

產(chǎn)品類型  一抗    

研究領(lǐng)域  腫瘤 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 新陳代謝  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 43kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human GCAT

亞    型  IgG

純化方法  affinity purified by Protein A

儲(chǔ) 存 液  Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500

（石蠟切片需做抗原修復(fù)）

抗體的熒光標(biāo)記法：

（一）基本原理

賴氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發(fā)波長(zhǎng)為492nm,發(fā)射光波長(zhǎng)為525nm)共價(jià)結(jié)合。與FITC結(jié)合的抗體可用為特異性的探針,以測(cè)定細(xì)胞相應(yīng)抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量(發(fā)射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。

（二）儀器和試劑

1.待偶聯(lián)抗體；

2.碳suan氫鈉緩沖液；

3.疊氮鈉；

4.庵氰酸熒光素；

5.電磁攪拌器。

抗體的制備過程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫動(dòng)物：常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。

4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。

5. 免疫血清的保存：抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

抗體分子標(biāo)記技術(shù)：

（一）原理

當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨suan殘基,某些組氨suan殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。

（二）準(zhǔn)備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過濾柱；￥-記數(shù)器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點(diǎn)

1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行；

2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨suan的碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。

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