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    人正常組織來源細(xì)胞遷移實驗的注意事項

    時間:2018-5-9閱讀:105
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    人正常組織來源細(xì)胞遷移實驗的注意事項

    (1)根據(jù)待測細(xì)胞體積大小選擇合適孔徑的ThinCert。常用的為8.0-μm孔徑

    (如AGS細(xì)胞),如果細(xì)胞體積較大可以考慮用10-μm孔徑;

    (2)根據(jù)待測細(xì)胞遷移能力強弱調(diào)整細(xì)胞數(shù)和遷移時間。常規(guī)24-well 

    ThinCert接種細(xì)胞數(shù)約為2≈5×104/well,遷移時間12≈36小時;

    (3)由于Greiner公司的24-Transwell內(nèi)含24個獨立的ThinCert,為了避免

    操作污染,每次實驗可預(yù)先另準(zhǔn)備一塊24孔普通培養(yǎng)板(Greiner);

    (4)如果細(xì)胞遷移能力較弱,下室液體可用3T3細(xì)胞無血清培養(yǎng)24小時獲得的

    上清加50μg/ml FN(Fibronectin),具體可查閱相關(guān)文獻;

    (5)細(xì)胞懸液加入膜中央,盡量保證液面水平;

    (6)固定染色擦洗時動作小心,避免擦去膜底面的細(xì)胞。但一定要充分擦凈膜

    表面上未遷移的細(xì)胞,以免影響讀數(shù)。尤其是膜周邊上可用細(xì)牙簽或小鑷

    子纏上濕棉花擦洗,但要小心避免將膜戳破;

    (7)Chamber和膜上都無法標(biāo)記,操作時應(yīng)小心避免混淆實驗組和對照組;

    (8)充分晾干,避免殘留水分導(dǎo)致鏡下聚焦不一致。

    人正常組織來源細(xì)胞侵襲實驗(cell invasion assay)

    實驗材料

    (1)Matrigel (BD 5mg/ml),-20℃保存

    (2)其余材料同遷移實驗

    140723-200501 鑒別 20mg γ-氨酪酸

    140728-200803 HPLC法含量測定 50mg 胸腺五肽

    140729-200501 HPLC法含量測定 25mg 賴脯胰島素

    140730-20060 HPLC法含量測定 20mg/4℃ 醋酸奧曲肽

    140731-200501 鑒別用 1.6PNA單位/支 尤瑞克林

    140732-200501 供門冬酰胺酶鑒別用 5mg 門冬酰胺酶(大腸桿菌)

    140733-200501 供門冬酰胺酶鑒別用 5mg 門冬酰胺酶(歐文菌)

    140735-200501 檢查 10mg 5'-胞苷酸

    140736-200501 鑒別及含量測定 10mg 4'-羥基苯乙酸

    140737-200501 HPLC法含量測定 10mg 5'-羥基吲哚乙酸
    人正常組織來源細(xì)胞

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