原代細胞培養生存期的三個階段

1. 原代細胞潛伏期（latent phase） ：

接種 經過 懸浮期（細胞質回縮,胞體呈圓球形） 貼壁。

初代培養細胞 經過 10～24小時或更多時間。

連續細胞系和癌細胞系 經過 10～30分鐘 貼附。

貼附現象是一個非常復雜和受多種因素的影響。

影響細胞貼附：底物表面不干凈，影響細胞貼附。

利于細胞貼附：底物表面帶有陽性物質與特殊物質:

纖粘連蛋白（fibronectin FN）、

細胞表面蛋白（cell surface proteinCSP）
這些物質有的存在與細胞表面,有的來自血清。

潛伏期特點：

長短與細胞接種密度、種類、使用的培養基性質有關。

（1）細胞貼附后進入潛伏期,細胞無增殖。少見分裂相，細胞有運動活動。

（2）初代培養 細胞潛伏期約為24～96小時或更長，

連續細胞系和腫瘤細胞潛伏期約6～24小時。

（3）細胞接種密度大潛伏期短。

（4）細胞出現分裂相增多時，標志細胞進入指數增生期。

2．指數增生期（logarithmic growth phase）：

特點：細胞增殖Z旺盛階段,分裂相增多。

細胞分裂指數（mitotie index MI） ：

表示每1000個細胞中的分裂相數。

條件：分裂相數與細胞種類、培養成分、pH培養箱溫度有關。

細胞分裂指數：

初代細胞：在0.1％～0.5％之間％ ,

連續分裂細胞和腫瘤細胞：3 ～5％ 

指數增生期是作為細胞一代活力的時期,是進行實驗和Z主要的階段。 

指數增生期持續3～5天，細胞數量增多后生長空間變小，細胞相互接觸可連接成片。 

正常細胞：細胞相互接觸能抑制細胞運動，這種現象稱為接觸抑制（contact inhibition）。 

腫瘤細胞：沒有這種現象，可作為區別正常與腫瘤細胞的標志之一。當腫瘤細胞達到一定密度后向三維空間發展，使細胞發生堆積（piled up）。 

由于細胞不斷增殖分裂，細胞數量持續增多，培養液的營養成分減少，代謝產物增多，細胞受營養的枯竭和代謝物的影響，則發生密度抑制（Density inhibition）,導致細胞分裂停止。 

3.停滯期（stagnate phase） 

細胞量和密度達到飽和，細胞停滯增殖。表明細胞進入到停滯期,細胞數量持平，也稱為平頂期（plateau）。 

特點：原代細胞不增殖,有代謝活動。培養液中的營養已逐漸耗盡,代謝產物積累增多,pH降低，此時需要傳代,否則細胞將會中毒,發生形態改變,細胞會從底物脫落死亡。 

注意： 

傳代過晚將影響下一代細胞的生長,至少要再傳 1～2代 ,通過換液淘汰死細胞和受損較輕的細胞。待細胞全部恢復后再用。
*        100克    氣單胞菌鑒別瓊脂
*        100克    血瓊脂基礎2號
*        1公斤    液體硫乙醇酸鹽培養基
*        100克    卵黃高鹽瓊脂基礎
*    RT    25克    胰膘肉湯基礎
*        25公斤    0.5%純度葡萄糖肉湯培養基
*        40克    固體改良馬丁瓊脂培養基
*        500毫升    聚山梨酯80培養基（真菌）
*    RT    100克    改良沙氏瓊脂培養基
原代細胞