凍存ATCC細胞的復蘇和培養

凍存ATCC細胞的復蘇和培養
1、 先準備好細胞培養皿或細胞培養瓶，及產品說明推薦的相應細胞培養基。并在37°c水浴中預先溫熱細胞培養基
 
2、小心取出裝有細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋一下的部分置于37°C水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應該盡快，大約短于2分鐘或待Z后一塊小冰晶體剛融化，就應該將細胞凍存管取出水浴。
 
3、在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用于菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。
 
4、小心擰干凍存管的頂部，將管內容物用1MI移槍轉移到9毫升培養基的無菌離心管中。離心5到7分鐘（125*g）.小心吸去上清液以去除抗凍劑（二甲基亞砜），避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養基中。將細胞懸液轉移到培養容器，輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5——8mI培養基并轉移到T125培養瓶。生長較快的細胞株可重懸于12——20mI培養基并轉移到T75培養瓶。
 
5、將細胞培養容器置于細胞培養箱，在溫度37°C二氧化碳濃度5%的培養條件下進行卵育。細胞培養24小時候后應在顯微鏡下觀察細胞形態和生長狀況 。