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    從小鼠腹腔中分離巨噬細胞

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    1.取6周左右的小鼠,剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml無菌的液體石蠟或巰基乙酸肉湯或4%淀粉肉湯。3~4天以后收集腹腔細胞。

    2.如要收集腹腔靜置巨噬細胞,不注射刺激物,直接從這一步開始。放血處死動物,以減少腹腔中的紅細胞。消毒腹部,沿腹中線注入3~4ml冰中預冷的無菌PBS-H(含10U/ml肝素和10%小牛血清的PBS)。輕輕按腹部5分鐘。

    3.以下均無菌操作。剪開腹壁,用吸管吸出滲出液,再用同樣容量的預冷PBS-H沖洗腹腔2~3次。合并滲出液于離心管中,4℃離心250×g 10分鐘,去上清液。

    4.用預冷的RPMI-1640培養液洗滌細胞3次,每次4℃離心250×g 10分鐘,去上清液。用預冷的適量RPMI-1640培養液懸浮細胞,臺盼藍染色計數細胞并決定細胞活力。

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