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    小鼠脫氧膠原吡啶交聯(DPD)ELISA試劑盒?標本的采集與保存

    時間:2022/1/11閱讀:292
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    小鼠脫氧膠原吡啶交聯(DPD)ELISA試劑盒標本的采集與保存:


    1.         血清:


    將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜,然后 1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20oC 或-80oC 保存,但應避免反復凍融。


    2.         血漿:


    用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的 30 分鐘內于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20oC或-80oC 保存,但應避免反復凍融。


    3. 組織勻漿:


    1) 取適量組織塊,于預冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);


    2) 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨,該過程需在冰上進行(有條件實驗室可選用機器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融 進一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復凍融法可重復2次)。


    3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測。


    4. 細胞裂解液:


    1)貼壁細胞需要先用yi酶消化,離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集);


    2)將收集到的細胞用冷PBS 洗3 次;


    3)物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞,再反復凍融):


    i 超聲破碎:取適量PBS 重懸細胞,用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂。


    ii 反復凍融:將待破碎的細胞在-20 oC 以下冰凍,室溫融解,反復3 次,使細胞溶脹破碎。


    4)將標本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘,收集上清備用。


    5. 細胞培養上清或其它生物標本:


    請 1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20oC 或-80oC 保存,但應避免反復凍融。


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