禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測試劑盒注意事項

 禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測試劑盒注意事項：   

１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。設立一個的PCR實驗室。

２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。

３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。

４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。

５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。

６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。

７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

實驗要點：
1．CTAB 溶液在低于15℃時會析出沉淀，因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預熱。  
2．在適條件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀，很容易一下子就從溶液中鉤出。不過，某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質，特別是多糖，使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀，這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。 
3．雖然可有效地使蛋白質變性，但酚不能*抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚的混合液，可減輕這兩種現象，同時可加入適量的，的作用是消泡，并使蛋白質層緊密，使水相和有機相分層較好。 細菌的培養和收集 將含有質粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12 小時至對數生長后期。小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA 十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。