影響腫瘤細胞表達的關(guān)鍵因素

腫瘤細胞使用瞬時轉(zhuǎn)染來蛋白瞬時轉(zhuǎn)染表達蛋白  以往為了獲得蛋白質(zhì)的高表達產(chǎn)量，必須先轉(zhuǎn)染細胞，然后挑選一個穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細胞系進行蛋白的擴增和富集。而挑選這樣一個細胞系往往需要花費數(shù)周甚至數(shù)月的時間，這既可能是由于試劑的細胞毒性也可能是由于轉(zhuǎn)染的低效率。如果是因為轉(zhuǎn)染試劑具有細胞毒性，那么只有少數(shù)細胞能夠存活，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)的產(chǎn)量很低。而如果是因為轉(zhuǎn)染成功的細胞太少，那么那些未轉(zhuǎn)染的細胞生長速度大大超過轉(zhuǎn)染成功的細胞，其結(jié)果同樣也只能產(chǎn)生少量的目標蛋白。使用一種溫和的可以轉(zhuǎn)染大多數(shù)細胞的轉(zhuǎn)染試劑，就可獲得蛋白質(zhì)的高表達。

現(xiàn)將一些影響蛋白表達的關(guān)鍵因素分列如下： 細胞系(有些類型的細胞比其他細胞產(chǎn)量高) 質(zhì)粒骨架(例如：增強子，啟動子，轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件) 目的蛋白(有些蛋白很難獲得高表達量) 目的蛋白的cDNA序列(例如：密碼子的優(yōu)化) 培養(yǎng)條件(營養(yǎng)物，代謝廢物，轉(zhuǎn)染抑制物)  當(dāng)這些因素都得到優(yōu)化，并加入合適配比和數(shù)量的轉(zhuǎn)染復(fù)合物(轉(zhuǎn)染試劑-質(zhì)粒)后，就可獲得至少達到平均表達水平的穩(wěn)定表達克隆。

瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染  制備一種穩(wěn)定細胞系的*步是選擇一種同時含有選擇性標記物和目的基因的載體。選擇性標記物通常是可以產(chǎn)生一種蛋白質(zhì)或者酶來幫助細胞在某些毒性物質(zhì)存在下存活的基因。一旦選好了質(zhì)粒載體，無論瞬時或者穩(wěn)定表達都采用一樣的轉(zhuǎn)染方法。在加入選擇性試劑之前，被轉(zhuǎn)染的細胞至少要在標準培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜。這樣就使細胞有時間表達足量的蛋白使之能夠耐受選擇性試劑的作用。腫瘤細胞于是在加有選擇性試劑的培養(yǎng)基中生長。那些未成功轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細胞即被殺死。而只有那些成功轉(zhuǎn)染的細胞能夠生長。有的時候，還可以將選擇性試劑持續(xù)加入到培養(yǎng)基中，以維持對細胞的選擇壓力。 
18910-70-8         左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)C標準品    30mg
174607-68-2         左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)F標準品    30mg
152575-13-8    Cefaclor, Delta-3 Isomer    頭孢克洛△3-異構(gòu)體標準品    30mg
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133481-09-1         加巴噴丁相關(guān)物質(zhì)B標準品    30mg
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108313-11-7         雷米普利相關(guān)物質(zhì)A標準品    30mg
腫瘤細胞