關(guān)于ATCC細(xì)胞消化

一、ATCC細(xì)胞酶消化法1.  胰酶。這是用得Z多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細(xì)胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細(xì)胞間。配制時(shí)不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。
2.  膠原酶。這種方法比較少，一般是用原代培養(yǎng)時(shí)，從組織消化下細(xì)胞。這種方法作用溫和，對(duì)細(xì)胞損傷較小，但是，價(jià)格也較貴。中止同樣是用血清。
二、離子螯合劑
不破壞細(xì)胞表面分子，僅與CAMs螯合，因此，如果檢測(cè)細(xì)胞表面分子的話，盡量，甚至是一定不要用酶消化法。
1.  EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細(xì)胞與間質(zhì)，對(duì)細(xì)胞間也有一定作用。注意，它能顯著影響pH值，而且在弱堿性條件下才易溶。因此，配制時(shí)應(yīng)調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此，消化下來(lái)的細(xì)胞要洗一遍。
2.  商品化的無(wú)酶消化液。個(gè)人的使用經(jīng)常覺(jué)得對(duì)細(xì)胞的損傷比較大，但是分離成單細(xì)胞懸液的能力確實(shí)比較強(qiáng)。
Gibco10082-147之細(xì)胞消化
三、ATCC細(xì)胞物理法
直接吹打或用細(xì)胞刮子將細(xì)胞刮下來(lái)。
四、冷凍法
這是本人做細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)發(fā)現(xiàn)的方法。此方法僅能用于細(xì)胞傳代時(shí)。無(wú)法使組織上的細(xì)胞脫落下來(lái)。本方法的原理，我想是因細(xì)胞冷凍后收縮，從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來(lái)。
優(yōu)點(diǎn)是：對(duì)細(xì)胞損傷小，不需要中止或洗細(xì)胞，方便，不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊，又特別嬌氣的細(xì)胞。不足是細(xì)胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡操作的間充質(zhì)干細(xì)胞、DC細(xì)胞的培養(yǎng)，效果非常滿意。
具體過(guò)程是：
1.  用較多的4度的PBS洗滌一遍細(xì)胞(以6孔板為例，加1.5 ml/孔)；
2.  再加0.5 ml 4度的PBS，靜置操作臺(tái)上，很細(xì)胞就小片脫落；
3.  輕輕吹打，細(xì)胞即*脫落；
4.  ATCC細(xì)胞按一定比例傳代。