ATCC細(xì)胞的復(fù)蘇操作步驟

1. 當(dāng)ATCC細(xì)胞傳代次數(shù)過多(超過50代)，細(xì)胞狀態(tài)變差時(shí)或細(xì)胞出現(xiàn)污染事故時(shí)，需要丟棄并對(duì)開始凍存的細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇。
 
2. 打開水浴鍋，設(shè)置溫度為40℃。
 
3. 查看細(xì)胞庫(kù)記錄，根據(jù)記錄從液氮灌中取出凍存的ATCC細(xì)胞(需戴上棉手套，防止被凍傷)，迅速丟入水浴鍋中并快速晃動(dòng)，在1~2 min內(nèi)使細(xì)胞溶液*溶解。
 
4. 將1ml細(xì)胞溶液加入9 ml*培養(yǎng)基中并混勻后轉(zhuǎn)入10cm培養(yǎng)皿。
 
5. 放回37℃、3%CO2和95%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
 
6. 第二天觀察ATCC細(xì)胞存活率。倒掉舊的培養(yǎng)基，加入10ml新鮮培養(yǎng)基。