原代小鼠胰腺星狀細胞 返回列表頁

細胞簡介：

小鼠胰腺星狀分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳suan氫鈉、yi蛋白酶原、脂肪酶、淀粉mei等。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質、脂肪和糖的作用。內分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成，胰島主要由4種細胞組成：α細胞、β細胞、γ細胞及PP細胞。α細胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細胞分泌胰島素，降低血糖；γ細胞分泌生長抑su，以旁分泌的方式抑制α、β細胞的分泌；PP細胞分泌胰多肽，抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星狀細胞（PSC）是胰腺纖維化的主要效應細胞，PSC分離和成功培養是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴，并表達Desmin蛋白，活化后的PSC則表達α-平滑肌肌動蛋白（alpha-SMA）。PSC具有靜息態與激活態兩種，并分別具有特異的標志物。靜息狀態PSC胞質內富含的脂滴可以被油紅O染成紅色，陽性表達Desmin。激活狀態PSC陽性表達alpha-SMA。油紅O染色發現，原代分離的細胞培養6d，胞漿中仍可見明顯的脂滴，傳代后，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失。免疫細胞化學染色顯示，細胞接種24h仍然表達Desmin，48h后Desmin基本不再表達。培養48h后絕大多數細胞開始表達alpha-SMA，隨著培養時間的增長和傳代次數的增加，細胞表達alpha-SMA，而不再表達Desmin，說明細胞活化。提示PSC接種24h后即啟動了激活過程，至培養第6d大多數細胞激活，傳代后細胞處于高度激活狀態。原代胰腺星狀細胞可作為慢性胰腺炎新藥的細胞篩選模型，目前研究發現：胰腺受損時，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細胞活化，導致細胞形態、功能發生變化，促使基質增生、膠原蛋白的大量生成及不規則沉積。
方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠胰腺星狀采用膠原酶制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠胰腺星狀經α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預冷的PBS中，盡可能的除去結締組織等，

3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養瓶中，倒置于細胞培養箱中，

4) 2h后，培養瓶中注入2 mL內皮培養基，小心將培養瓶正置于培養箱，確保組織塊不會飄起來，

5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內皮細胞重新鋪瓶。

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出T-25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置4-6小時或過夜，以穩定細胞狀態，然后換用新鮮培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入培養液終止消化，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）用適當量的凍存液（基礎培養基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養液5ml混勻細胞，然后將細胞懸液轉移至適當面積大小的培養皿中；

3）放置于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。