線粒體活性氧產生速率（ROS）熒光法 返回列表頁

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

商品屬性：

商品介紹：

測定意義

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等，研究表明，機體95％以上的活性氧（ROS）都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。

正常情況下，細胞內抗氧化防御系統與氧自由基處于平衡狀態，細胞內活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細胞內抗氧化系統與氧自由基的平衡被打破，細胞內活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機體出現氧化應激，同時，活性氧還可攻擊線粒體DNA產生氧化損傷，導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。

因此，通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜，在線粒體內被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數據點擬合，線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標儀、恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水。

實驗方法學：

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。

Fmoc-D- BR2.4-D丁酯 分析標準品，99%Anti-Phospho-FLT3 (Tyr589/591) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠化FMS樣激3抗體IgG

芴甲氧羰酰基-6-己酸 98%2.4-D丁酯標準溶液 100μg/ml,u=3%Anti-Phospho-FLT3 (Tyr842) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠化FMS樣激3抗體IgG

FMOC--4-甲酸 97%2.5-D丁酯標準溶液10μg/ml,u=6%,溶劑:正己烷Anti-Phospho-FLT3 (Tyr969) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠化FMS樣激3抗體IgG

N'-芴甲氧羰基-N-芐氧羰基-L-賴 98.0%2,4-滴異辛酯  分析標準品Anti-VEGFR-3/FLt-4 /FITC  熒光素標記血管內皮生長因子受體-3IgG

N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-D- 97%順式戊菊酯 分析標準品，99%Anti-VEGFR-3/FITC  熒光素標記血管內皮生長因子受體-3抗體IgG

FLAG® Peptide菊酯 分析標準品，99.5%Anti-HSP-70/RBITC  羅丹明標記熱休克蛋白-70抗體IgG

纖維蛋白肽 B 人類 ≥97% (HPLC)基阿維菌素苯甲酸鹽 分析標準品，90.5%Anti-VHL/FITC  熒光素標記一種腫瘤抑制因子抗體IgG

甘-L-亮 98%乙蒜素 分析標準品，99%Anti-Vimentin/FITC  熒光素標記波形蛋白抗體IgG

線粒體活性氧產生速率（ROS）熒光法檢測試劑盒環溴 99%Anti-BrdU  溴脫氧尿苷抗體人鈣非依賴性脂A2(iPLA2)聯免疫吸附測定試劑盒

環溴 98%Anti-BRN3A  轉錄因子Brn3蛋白抗體人鳥苷環化激活因子2B(GUCA2B)聯免疫吸附測定試劑盒

對叔丁酯 99%Anti-Brs3/Bombesin Receptor 3  蛙皮素受體3抗體人顆粒K(GZMK)聯免疫吸附測定試劑盒

對氨乙酮 99%Anti-SMARCA4/SNF2 beta  抑癌因SNF2β抗體人花生四烯脂加氧3(ALOXE3)聯免疫吸附測定試劑盒

4-羥二酮 98%Anti-Brucella  布魯氏菌抗體人色素P450家族成員26A1(CYP26A1)聯免疫吸附測定試劑盒

2-巰-1-咪唑 98%Anti-BRMS-1  癌轉移抑制因1抗體人血紅蛋白(HB)聯免疫吸附測定試劑盒

環己鹽鹽 電子級Anti-Brucella  布氏桿菌菌體蛋白抗體人全色素C合(HCCS)聯免疫吸附測定試劑盒

二乙酰一肟 ARAnti-BSA  牛血清白蛋白抗體人鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激IIα(CAMK2α)聯免疫吸附測定試劑盒

二乙酰一肟  >98.0%(GC)Anti-BSEP  膽汁鹽輸出泵蛋白抗體人Bcl2關聯永生因3(BAG3)聯免疫吸附測定試劑盒

氫 AR,≥47.0%Anti-Bone sialoprotein  骨涎蛋白抗體人芳硫酯B(ARSB)聯免疫吸附測定試劑盒  

鈉 80%（劇品）Anti-BTG2/TIS21  B遷移因2抗體人組氨豐富糖蛋白(HRG)聯免疫吸附測定試劑盒

間溴氟 99%Anti-BTK/ATK  蛋白酪氨激ATK抗體人硫乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)聯免疫吸附測定試劑盒

三氧化二銻 SPAnti-Phospho-Btk(Ser180)  化蛋白酪氨激ATK抗體人膜聯蛋白A5(ANXA5 )聯免疫吸附測定試劑盒  

三氧化二銻 99.99% metals basisAnti-Phospho-Btk(Tyr223)  化蛋白酪氨激ATK抗體人HtrA絲氨肽1(HTRA1)聯免疫吸附測定試劑盒

銻粒 99.999% metals basis,beads,1-6 mmAnti-C5a  過敏素C5a（補體C5a）抗體人白介素10受體β(IL10Rβ)聯免疫吸附測定試劑盒