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    小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞

    參  考  價(jià)面議
    具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

    產(chǎn)品型號(hào)

    品       牌其他品牌

    廠商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商

    所  在  地上海市

    更新時(shí)間:2022-05-19 11:41:48瀏覽次數(shù):159次

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    原代細(xì)胞
    細(xì)胞培養(yǎng)
    貨號(hào) GOY-01X1168
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    公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好,我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞

    規(guī)格

    5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

    分類(lèi)

    原代細(xì)胞

    貨號(hào)

    GOY-01X1168

    商品介紹:

    名稱(chēng) 小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞

    2.組織來(lái)源:支氣管組織

    3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

    4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

    小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞分離自支氣管組織;支氣管(Bronchi),是指由支氣管分出的各級(jí)分枝,由支氣管分出的一級(jí)支氣管,即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較,前者較細(xì)長(zhǎng),走向傾斜;后者較粗短,走向較前者略直,所以經(jīng)支氣管墮入的異物多進(jìn)入右主支氣管。支氣管和支氣管還有以區(qū)別就是,支氣管是以“C"型的支氣管軟骨為支架,而支氣管不是。支氣管平滑肌細(xì)胞主要功能:支氣管平滑肌細(xì)胞能維持支氣管張力,保持支氣管形態(tài);支氣管平滑肌特異的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和調(diào)節(jié)機(jī)制是支氣管正常生理功能的基礎(chǔ);支氣管平滑肌通過(guò)分泌細(xì)胞因子和趨化因子等促炎介質(zhì),發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。支氣管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),高低起伏;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。

    5.方法簡(jiǎn)介:

    ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

    6.質(zhì)量檢測(cè):

    ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

    7.培養(yǎng)信息:

    培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、PenicillinStreptomycin

    產(chǎn)品貨號(hào)CM-M158

    換液頻率每2-3天換液一次

    生長(zhǎng)特性貼壁

    細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣

    傳代特性可傳3代左右

    消化液0.25%

    培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%CO25%

    使用方法:

    收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

    1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

    2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    3. 細(xì)胞傳代

    1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;

    2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;

    3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

    4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

     

    培養(yǎng)操作:

    1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

    2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

    2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

    3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

    4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

    3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi);

    1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
    圖片13.jpg

    細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

    一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

    1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

    2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

    3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。

    二.細(xì)胞處理:

    1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

    2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

    方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

    250mL MES Buffer,1.0M,pH5.5  MES Buffer,1.0M,pH5.5  常溫保存 0.47-30 ng/mL 人粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA試劑盒

    100次 植物種屬鑒定PCR Mix 1(細(xì)胞核ITS) Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人ALK激受體ELISA試劑盒

    2 ug pMSCV-neo pMSCV-neo 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)?嵌?L?

    小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞DNA甲基綠瓊脂基礎(chǔ) Dnase Agar Base with Methyl Green 100

    10次 百萬(wàn)堿基級(jí)動(dòng)物DNAout  

    1瓶 EBTr (NBL-4)細(xì)胞株 EBTr (NBL-4) 低溫運(yùn)輸和保存

    HIV1 p55+p24+p17  艾滋毒抗體 規(guī)格: 0.2ml

    Rabbit Anti-Goat IgG/PE  PE標(biāo)記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

    LRRC41  LRRC41蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

    phospho-CPI17 alpha (Thr38)   磷酸化蛋酸激PKC/CPI-17抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Biotin  兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml

    T7 tag  T7 tag標(biāo)簽抗體 規(guī)格: 0.1mlCIP2A/p90 Autoantigen  蛋酸PP2A抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

    CCDC98  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白98抗體 規(guī)格: 0.2ml

    CRIM1  富含半運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

    ABCG2/CD338  三磷酸苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體 0.1ml

    DLL4/Delta 4  Notch信號(hào)通路Delta樣配體4抗體 規(guī)格: 0.1ml

     


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