蜜環(huán)菌 返回列表頁(yè)

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

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菌種的培養(yǎng)：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過(guò)0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備　

種子罐種子制備的工藝過(guò)程，因菌種不同而異，一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級(jí)種子，把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。

苯甲 ACS, ≥99.0% AR,99%Nm23(NDP Kinase A,NDPKA)  腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因抗原

苯甲 AR,99%硫脲 CP，98%Nm23-H1 (nucleoside dIPhosphatase kinase A)  腫瘤抑制基因抗原

無(wú)水甲酸 AR，98% from soybean,>90%Nogo-B/A  軸索過(guò)度生長(zhǎng)抑制因子-B/A抗原

甲酸 for HPLC,≥98%5,10,15,20-四(4-吡基)卟啉 97%NOS-2 peptide  一氧化氮合成-2多肽抗原

甲酸 95%苯酞 99%Notch1/MOTC(Neurogenic locus notch homolog protein 1)  跨膜受體蛋白Notch-1抗原

甲酸 99%2-溴-3-甲基丁酸 98%NADPH peptide  還原型輔Ⅱ抗原

氯化氫-乙溶液 氯化氫含量: 30-40%氯化磷酰鈣鹽，四水 98%NADPH peptide  還原型輔Ⅱ抗原

氯化氫-甲溶液 氯化氫含量: 20-35%D-果糖-1，6-二三鈉鹽,無(wú)水 98%proCNP/NPPC (pro-natriuretic peptide)  促尿鈉排泄肽前體C抗原

蜜環(huán)菌(S)-(+)-2-氨-1-丁 98%NOS-3 (eNOS) endotheli cell NOS  一氧化氮合成-3（抗原）猴結(jié)合蛋白(DBP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

(R)-(-)-2-氨-1-丁 98%NPY ( Neuropeptide Y)  神經(jīng)肽 Y（抗原）猴失調(diào)癥蛋白質(zhì)2(ATXN2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

2--4'-聯(lián) 98%NR2B (Glutamate receptor)  谷氨受體（抗原）猴趨化因子C-C-元配體16(CCL16)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

0.98NT-3  神經(jīng)生長(zhǎng)因子-3（抗原）猴T受體(TCR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

0.99NT-4,NT-5  神經(jīng)生長(zhǎng)因子4/5（抗原）猴睪酮受體(TR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

  97%NTN (Neurturin)  神經(jīng)生長(zhǎng)因子（抗原）猴黑素瘤黏附分子(MCAM)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

環(huán)氧烷  99%Bcl-xL(human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse)  Bcl-xL蛋白抗原猴補(bǔ)體因子3(C3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

環(huán)氧烷  CPphospha-Bcl-xL (pSer62) peptide (human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse)  化(Ser62)Bcl-xL蛋白抗原猴促有絲分裂因子(MF/MPF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

環(huán)氧烷  99.5%BCHE(butyrylcholinesterase)NT  丁酰脂抗原(N端)猴β葡糖苷(β-Glu)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

環(huán)氧烷  分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.7% (GC)BCHE(butyrylcholinesterase)CT  丁酰脂抗原(C端)猴接觸蛋白相關(guān)蛋白樣蛋白2(CNTNAP2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

四羥硫 75%水溶液Nurr1  核受體相關(guān)因子-1（抗原）猴同線蛋白2(ST2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

鈣 AR， ≥99.0% (RT)CD73 (5′-nucleotidase cytosolic II )  胞漿-5′-核苷-Ⅱ 抗原猴過(guò)氧化物體增殖物激活受體γ( PPAR-γ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

 AR,50 % in H2O BECN1(Beclin1)  一種抑癌因（多肽）猴尿激型纖溶原激活因子受體(PLAUR/uPAR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

鈉 AR,99.0%OGP (Ostegenic Growth Peptide)  成骨生長(zhǎng)肽 (骨生長(zhǎng)激素肽)(蛋白多肽)猴粘蛋白21(MUC21)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

鈉 CP,98.0%OPN  骨橋蛋白（多肽抗原）猴胸腺非依賴性抗原(TI-Ag)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒