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    免疫沉淀過程中需要注意的幾個關鍵影響因素

    時間:2017-4-28閱讀:264
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    1、進口原裝elisa試劑盒樣品處理的質量

       免疫沉淀實驗成功的關鍵在于*步樣品處理。免疫沉淀實驗本質是處于天然構象狀態的抗原和抗體之間的反應,而樣品處理的質量決定了抗原抗體反應中抗原的質量,如抗原的豐度及抗原的構象狀態。
       樣品處理應根據抗原樣品的來源如組織樣品、細胞或其他形式的樣品,選擇適當的方式進行細胞或組織破碎,使待檢抗原釋放至樣品溶液中。裂解緩沖液的使用應注意添加合適的蛋白酶抑制,避免抗原或抗原-其他分子復合物被降解,另外,應選用去垢劑強度合適的裂解液,既保證有效裂解細胞釋放抗原又不破壞蛋白質之間的相互作用。

    2、抗體的選擇
       在考慮抗體特異性的同時,還需考慮抗體對抗原的親和力,如單克隆抗體只對抗原的單一表位具有良好的特異性,因此在免疫沉淀中如果抗原表位暴露不充分,受到破壞,或受其他因素影響,造成抗體不能識別抗原,無法有效形成免疫沉淀復合物,那么這將直接影響免疫沉淀的結果。而多克隆抗體或混合單克隆抗體可以和抗原的多個表位結合,從而解決親和力的問題。但是,并不是所有抗體都能用于免疫沉淀,進口原裝elisa試劑盒應選用經IP實驗驗證后的抗體以確保實驗結果的可靠性。此外,不同類型、同類不同亞型的抗體對蛋白 A或G的親和力不同,應選擇合適的抗體及微球用于免疫沉淀。

    3、微球的選擇
       目前廣泛應用于免疫沉淀的微球以結合了蛋白 A或G的瓊脂糖和磁性微球為主。瓊脂糖材料是無色透明、粒徑達微米級的具有多孔表面的微球,有巨大的表面積,蛋白結合量高,曾一度成為免疫沉淀技術中的主要材料。但在免疫沉淀操作中需要采用離心的方法達到固液分離,而反復離心產生的物理應力極易破壞蛋白的天然構象及完整性,且由于瓊脂糖本身容易破碎,不易保存,限制了瓊脂糖微球在免疫沉淀中的發展。相比之下,磁性微球其核心為超順磁性粒子,核心外層包裹一層高分子材料,表面平滑,粒徑可達納米級,比表面積大,單位重量的微球蛋白結合量更大。超順磁性微球可以在外加磁場中表現磁性,實現快速有效分離,大大縮短實驗操作時間。溫和的磁性分離方式避免反復離心對蛋白天然構象及完整性的破壞。超順磁性微球在增大機械強度和穩定性的同時,縮減了產品造價。上述的優勢使超順磁性微球成為免疫沉淀試劑盒行業的新秀,進口原裝elisa試劑盒逐漸被研究者所采用。

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