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    小鼠蛋白酪氨酸激酶(PTK)酶聯免疫檢測試劑盒技術參數

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    小鼠蛋白酪氨酸激酶(PTK)酶聯免疫檢測試劑盒工作原理
    本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中小鼠蛋白酪氨酸激酶(PTK)的水平。向預先包被了小鼠蛋白酪氨酸激酶(PTK)單克隆抗體的酶標孔中加入蛋白酪氨酸激酶(PTK),溫育;溫育后,加入生物素標記的抗PTK抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中小鼠蛋白酪氨酸激酶(PTK)的濃度呈正相關。
    注意事項
    從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
    各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。
    嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
    為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
    不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
    底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
    洗板方法
    手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
    自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 
    標本要求
    1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    小鼠蛋白酪氨酸激酶(PTK)酶聯免疫檢測試劑盒操作程序
    標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋):
    1200U/ml
    (5號標準品)
    120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液
    600U/ml
    (4號標準品)
    120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液
    300U/ml
    (3號標準品)
    120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液
    150U/ml
    (2號標準品)
    120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液
    75U/ml
    (1號標準品)
    120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液
    根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
    加樣:1)空白孔:空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗PTK抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標準品孔:加入標準品50μl,鏈霉素-HRP50μl(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)待測樣品孔:加入樣本40μl,然后各加入抗- PTK抗體10μl、鏈酶親和素-HRP50μl,蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
    配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
    顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
    測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
    9.小鼠蛋白酪氨酸激酶(PTK)酶聯免疫檢測試劑盒根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。

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