鴨子白細胞介素4（IL-4）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

鴨子白細胞介素4（IL-4）酶聯免疫分析試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中鴨子白細胞介素4（IL-4）水平。用純化的鴨子
白細胞介素4（IL-4）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細
胞介素4（IL-4），再與HRP標記的白細胞介素4（IL-4）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗
體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在
酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素4（IL-4）呈正相關。用
酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中鴨子白細胞介素4
（IL-4）濃度。
鴨子白細胞介素4（IL-4）酶聯免疫分析試劑盒組成
130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（640pg/ml）0.5ml×1瓶
3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
鴨子白細胞介素4（IL-4）酶聯免疫分析試劑盒操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
320pg/ml5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
160pg/ml4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
80pg/ml3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
40pg/ml2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
20pg/ml1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然后再加待測樣品10µl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：鴨子白細胞介素4（IL-4）酶聯免疫分析試劑盒以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止
液后15分鐘以內進行。