惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞；NTERA-2培養(yǎng)操作步驟

惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞；NTERA-2培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

6．快速固定步驟需謹(jǐn)慎操作，以避免細(xì)胞形態(tài)的改變或抗原的損失。將取出的蓋玻片置于含有4%多聚甲醛的固定液中，室溫下固定10-15分鐘。固定時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以防細(xì)胞結(jié)構(gòu)過(guò)度硬化。

7．固定完成后，用PBS（磷酸鹽緩沖液）漂洗蓋玻片3次，每次5分鐘，以去除殘留的固定液。此步驟對(duì)于后續(xù)的免疫染色至關(guān)重要，能有效減少背景噪音。

8．接下來(lái)進(jìn)行通透化處理，使用0.1% Triton X-100溶液處理蓋玻片10分鐘，使細(xì)胞膜通透性增加，便于抗體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與抗原結(jié)合。

9．通透后，再次用PBS漂洗3次，隨后進(jìn)行封閉處理，用含5%胎牛血清的PBS封閉液覆蓋蓋玻片，室溫孵育30分鐘，以減少非特異性抗體結(jié)合。

10．最后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的特異性抗體進(jìn)行免疫染色，并按照抗體說(shuō)明書推薦的步驟進(jìn)行孵育、洗滌、顯色等操作，直至完成整個(gè)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)流程。通過(guò)顯微鏡觀察染色結(jié)果，分析惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞NTERA-2的形態(tài)學(xué)特征及相關(guān)蛋白表達(dá)情況。