LP Ag elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟

LP Ag elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘。

 裂殖壺菌

 隱甲藻

 浮游球衣菌

 單核增生李斯特菌

 水螺菌

 腸炎沙門氏菌腸炎亞種

 熒光假單胞菌

 萎蔫短小桿菌

 粘液玫瑰單胞菌

 海藻希瓦氏菌

 嗜鹽細菌屬

 新鞘氨醇單胞菌

 蜃樓耶爾森氏菌

 脫氮假單胞菌

 脫氮付球菌

 耐放射異常球菌

 桃色歐文氏菌

 丁香假單胞菌

 白色噬瓊膠菌

 假交替單胞菌

 鼠李糖乳桿菌

 雙歧雙歧桿菌

 噬糖鹽紅菌

 師崗鏈霉菌

 委內(nèi)瑞拉鏈霉菌

 枯草芽孢桿菌

 彎曲芽孢桿菌

 缺陷短波單胞菌

 副凝聚短狀桿菌

 氧化微桿菌

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