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    ?NADH氧化酶(NOX)測試盒操作步驟

    時間:2021/11/24閱讀:427
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    NADH氧化酶(NOX)測試盒操作步驟:


    1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

    7. 溫育:操作同3。

    8. 洗滌:操作同5。

    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

    10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘。

    COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞

    SF9, 昆蟲卵巢細胞

    BRL 3A, 大鼠肝正常細胞

    HK-2, 人腎皮質近曲小管上皮細胞

    HET-1A, 人食管上皮細胞

    RGC-5, 小鼠視網膜神經節細胞

    GC-1, 鼠精原細胞

    293A,人胚腎上皮細胞系(腺病毒包裝級別)

    hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞

    293T, SV40轉化的人胚腎上皮細胞系

    EPC, 大鼠血管內皮祖細胞

    HBE, 正常人支氣管上皮細胞系

    HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細胞

    HUVEC-12, 人臍靜脈血管內皮細胞系

    HUM, 正常人主動脈平滑肌細胞

    HAVSMC, 人主動脈平滑肌細胞


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