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    小鼠抗人kappa雜交瘤細胞;細胞株培養的無菌技術要點

    時間:2021/6/23閱讀:146
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    小鼠抗人kappa雜交瘤細胞;mAbhIgκ-490細胞株培養的具體無菌技術要點:

    1. 實驗開始前,無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌,用70%ethanol擦拭無菌操作臺面,并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后,才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株,即使培養基*相同也不可共用培養基,以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后,請將實驗物品拿出工作臺,用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后,才能進行下一個細胞株的操作。
    2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞,必要物品(試管架、吸管、吸取器或吸管盒等)可以暫時放置,其它實驗用品使用完畢后應移出,有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成,請勿在邊緣非無菌區域進行操作。
    3. 小心取用無菌實驗物品,避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處,也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后,請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身,傾斜大約45°角取用,盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
    4. 定期檢測下列項目:
    4.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
    4.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染(水盤的水需用無菌水,每周定時更換)。
    4.3. 無菌操作臺內的airflow壓力,定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜,預濾網(300小時/預濾網,3000小時/HEPA)。

    5. 工作人員應當首先注意自身安全,必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作,并選擇適當等級的無菌操作臺進行(至少是Class II)。操作過程中,應避免引起aerosol的產生,小心有毒性藥品,例如DMSO和TPA等,并避免針頭的傷害等等。

    6. 水槽內可添加消毒劑(Zephrin 1:750),需定期更換水槽中的水。

    人腦血管平滑肌細胞
    人海馬神經元
    人少突膠質細胞
    人星形膠質細胞
    小鼠成纖維細胞(EGFP標記)
    mCF, 小鼠心臟成纖維細胞
    MN-c, 小鼠皮質神經元
    MN-h, 小鼠海馬神經元
    MSC, 小鼠雪旺細胞
    MA, 小鼠星形膠質細胞
    MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞
    mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞
    CSC, 小鼠心肌細胞
    mEPC, 小鼠內皮祖細胞-骨髓
    MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞
    NSC,大鼠神經干細胞
    RN-h, 大鼠海馬趾神經元
    rEPC,大鼠內皮祖細胞-骨髓
    RN-c, 大鼠皮質神經元
    RN-s, 大鼠紋狀體神經元
    RSC, 大鼠雪旺細胞
    RA, 大鼠星形膠質細胞
    RLF, 大鼠淋巴成纖維細胞

     

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