肺炎支原體PCR檢測試劑盒樣品活化方法

肺炎支原體PCR檢測試劑盒樣品活化方法：

生物樣品中的通常以無活性的形式存在，在檢測指標(biāo)活性前必須進(jìn)行活化處理。
活化方法如下：
血清、血漿： 280 μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品，混勻，加入40 μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2，混勻后立即檢測。
注意：樣品被稀釋了10倍！
細(xì)胞培養(yǎng)上清：20 μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液中加入100 μL樣品，混勻，加入40 μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2，混勻后立即檢測。
注意：樣品被稀釋了2倍！
組織勻漿：1960 μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品，混勻后檢測。
注意：樣品被稀釋了50倍！
試驗所需自備物品
1. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙
ELISA實驗中給檢測樣本加樣的步驟詳解
1.細(xì)胞上清:前處理必須是細(xì)胞離心去除,每孔直接加100p1即可。如果濃度太高需稀釋時,用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接稀釋。
2.腦脊液:前處理必須是細(xì)胞離心去除,每孔直接加100W1即可。如果濃度太高需稀釋時,用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接稀釋。
3.血清血漿:加入50u山樣本分析緩沖液后加50u標(biāo)本如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩神液等量加入,不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補充至100u。
①血清標(biāo)本應(yīng)是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液。
②血漿標(biāo)本,推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測,標(biāo)本收集后請分裝凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融。
③血清標(biāo)本不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑。
④標(biāo)本應(yīng)清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應(yīng)通過離心去除。
⑤請勿使用溶血,高血脂或污染的標(biāo)本檢測,否則結(jié)果將不準(zhǔn)確。
4.組織勻漿液的樣本:要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑,防止蛋白成份被內(nèi)源性蛋白酧降解,造成檢測結(jié)果的值偏低。因組織勻漿液的樣本蛋白種類多,含量豐富,驗參照血清血漿標(biāo)本的處理方法進(jìn)行,否則就會影響實驗結(jié)果。具體是加入50u樣本分析緩沖液后加50u標(biāo)本,需稀釋時,請將樣本與樣本分析緩神液等量加入,不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補充至100ul。