ELISA酶免疫技術類型

酶免疫技術類型

酶免疫技術按照抗原抗體系統是定位于組織細胞上還是存在于液體樣品中分為酶免疫組化技術和酶免疫測定（EIA），酶免疫測定又可分為均相酶免疫測定和異相酶免疫測定。

（一） 均相酶免疫測定

均相酶免疫測定是利用酶標記物結合成抗原抗體復合物后，標記酶的活性就受到抑制，因而反應后不需分離結合的和游離的酶標記物，直接測定系統中的總標記酶的活性的變化，即可確定結合的酶標記物的數量，從而得到待測物的含量的一種技術。常用于半抗原或小分子抗原如藥物、激素等的測定。常用的技術類型有：

1．酶免疫增強測定技術（EMIT）：酶免疫測定增強技術中酶活性的抑制是由于標記抗原與抗體結合后空間位阻了酶與底物結合的部位而造成的。反應模式常用競爭法，即當未標記抗原多，競爭性的與抗體結合多，則標記抗原與抗體結合少，酶的活性受到抑制少，酶活性高。因此，終測得的酶活性與未標記物的含量呈正相關。
 

2．克隆酶供體免疫分析（CEDIA）：克隆酶供體免疫分析中酶是以供體和受體兩個片段存在的，只有兩個片段結合在一起形成全酶才能具有活性，當標記了供體酶的抗原與抗體結合后就空間位阻了酶供體（ED）與酶受體（EA）的結合，從而不能形成有活性的全酶，酶活性受到抑制。在反應模式上同樣為競爭性結合分析方法，終測得的酶活性與未標記抗原的含量呈正相關。
 

（一） 異相酶免疫測定

異相酶免疫測定與均相酶免疫測定的大區別是抗原抗體反應平衡后，在反應體系中同時存在著游離的和結合的兩種酶標記物，兩種標記物上的酶都具有酶活性，而只有結合的酶標記物的形成與含量才代表待測物的存在與含量。因此，需將游離的和結合的酶標記物分離，測定結合狀態的酶標物的活性推算待測物的含量。因分離游離和結合的標記物的方法不同，異相酶免疫測定又分成液相酶免疫測定和固相酶免疫測定兩類方法。液相酶免疫測定，由于游離的和結合的標記物都存在于液相中，故需用分離劑將二者分開后才能測定結合狀態的酶標記物的活性。而固相酶免疫測定，是通過載體將結合狀態的酶標記物吸附在固相支持物上，只需洗滌就可將游離的酶標記物去除。目前固相酶免疫測定以酶聯免疫吸附試驗（ELISA）為常用。