分享ELISA檢測試劑盒新手入門的使用技術(shù)

 公司技術(shù)專員為ELISA檢測試劑盒新手入門的使用技術(shù)報告做出一番整理，在這里分享給您供參考。
ELISA方法原理
  1.雙抗體(原)夾心法：檢測抗原(體)的常見方法，應(yīng)用針對抗原兩個不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標(biāo)抗體檢測溶液中的抗原(適用于二價以上抗原，不能測 小分子半抗原)。
  2.間接法：檢測抗體的方法，利用酶標(biāo)記的抗抗體(第二抗體)檢測已與固相抗原結(jié)合的抗體。
  3.競爭法：檢測抗原或小分子半抗原、抗體，以測抗原為例，使待測抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合，結(jié)果如待測抗原含量越多，與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原就越少，顯色越淺，二者呈負(fù)相關(guān)。
操作注意
① 使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
② 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
③ 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
ELISA試劑盒質(zhì)控分析
1.人員培訓(xùn)內(nèi)容包括：
①檢驗項目的基本原理(ELISA試劑盒原理)；
②熟悉檢測技巧，了解易出差錯的環(huán)節(jié)及難點；熟悉檢測試劑性能(包括試劑盒組成，包被片段及其組成)；
③熟悉檢測儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識；
④某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。

2.基本了解
① 1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗發(fā)展為ELISA試劑盒技術(shù)。
② 特點：ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"。
③ 酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì)，進行信號放大；
④ 有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過程；
⑤ 靈敏度特異性相對較高。
⑥ 局限性：只能檢測到ng水平
⑦ 精密度差(批內(nèi)CV15-20%)；
⑧ ELISA檢測試劑盒線性范圍窄(一個數(shù)量級)；
⑨ 存在"HD-HOOK"效應(yīng)。