TSZelisa試劑盒加酸或堿終止酶促反應(yīng)

目前常用的幾種TSZelisa試劑盒方法有：測(cè)定抗體的間接法，測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本實(shí)驗(yàn)采用間接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要過(guò)程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加待測(cè)抗體，保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標(biāo)抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應(yīng)，用目測(cè)或光電。
三、操作步驟
①抗原包被：兔抗人IgG ELISA試劑盒作為抗原，用包被液l：8000稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過(guò)夜。
②洗滌：次日傾去凹孔內(nèi)的液體，洗滌液洗3次。
③封閉：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h.
④洗滌：用洗滌液洗3次。
⑤加待測(cè)樣品(一抗)：將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(按照1：2或1：10)，100μL /孔加到 已包被的板上，每個(gè)樣品平行做兩份，PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，已知樣品作為陽(yáng)性對(duì)照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗滌：用洗滌液洗3次。
⑦加酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l ：8000稀釋，100μL／孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗滌：用洗滌液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮配制的底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍(lán)色。
⑩終止反應(yīng)、比色：加50μL/孔終止液。TSZelisa試劑盒顏色變黃；用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm 處各孔的吸光值，陽(yáng)性反應(yīng)的大稀釋度為待測(cè) 樣品的效價(jià)。
4-吡啶基硫脲    164670-44-4    號(hào)：    4-PYRIDYLTHIOUREA    英文名稱：
4-吡啶基乙酸鹽酸鹽, 98+%        號(hào)：    NA    英文名稱：
4-吡啶甲胺    3731-53-1    號(hào)：    4-Pyridinemethaneamine    英文名稱：
4-吡啶硼酸(含有數(shù)量不等的酸酐)    1692-15-5    號(hào)：    Pyridine-4-boronic acid    英文名稱：
4-丙烯酰嗎啉 97％    5117/12/4    號(hào)：    4-Acryloylmorpholine    英文名稱：
4-差向脫水四環(huán)素    4465-65-0    號(hào)：    4-Epianhydrotetracycline Hydrochloride    英文名稱：
4-碘苯胺;對(duì)碘苯胺;對(duì)氨基碘苯;1-氨基-4-碘苯    540-37-4    號(hào)：    4-Iodoaniline;p-AMinoiodobenzene;    英文名稱：
4-碘苯甲酸;對(duì)碘苯甲酸    619-58-9    號(hào)：    4-Iodobenzoic acid    英文名稱：
TSZelisa試劑盒