進(jìn)口原裝elisa試劑盒使用限制酶注意事項(xiàng)

1.進(jìn)口原裝elisa試劑盒甲基化的影響 
從帶有DNA甲基化酶基因的宿主菌中制備的DNA，其堿基的一部分已經(jīng)被甲基化，因此即便使用能夠識別、切斷被甲基化部分的序列的限制酶，也幾乎無法切斷被甲基化的部分。被甲基化的部位，根據(jù)底物DNA及宿主種類的不同而不同。例如宿主菌為大腸桿菌的情況下，根據(jù)宿主的種類有以下兩種情況： 在進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)，通常使用的菌株為C600、HB101、JM109等，因?yàn)槎紟в衐am、dcm甲基化酶，所以使用這些菌株制備的DNA時(shí)，必須注意。另外，動(dòng)物由來的DNA，CG序列多為5mCG；植物由來的DNA，CG及CNG序列多為5mCG和5mCNG。 
2. Star活性 
限制酶在一些特定條件下使用時(shí)，對于底物DNA的特異性可能降低。即可以把與原來識別的特定的DNA序列不同的堿基序列切斷，這個(gè)現(xiàn)象叫Star活性。Star活性出現(xiàn)的頻率，根據(jù)酶、底物DNA、反應(yīng)條件的不同而不同，可以說幾乎所有的限制酶都具有Star活性。并且，它們除了識別序列的范圍增大之外，還發(fā)現(xiàn)了在DNA的一條鏈上加入切口的單鏈切口活性，所以為了極力抑制Star活性，一般情況下，即使會(huì)降低反應(yīng)性能，我們也提倡在低甘油濃度、中性pH、高鹽濃度條件下進(jìn)行反應(yīng)。 
3. 部分分解 
如果使用預(yù)計(jì)的限制酶對底物DNA進(jìn)行作用，而未能*將其切斷，其原因除了上述兩點(diǎn)和酶失活之外，DNA的純度、反應(yīng)阻害物的影響、DNA的種類等也有關(guān)系。進(jìn)口原裝elisa試劑盒特別是由于DNA種類不同，它們的大小、切點(diǎn)數(shù)也不同，達(dá)到*分解時(shí)，所需要的酶量也不同，從這些數(shù)據(jù)中計(jì)算出的 [*分解1 μg DNA所需要的限制酶預(yù)計(jì)量] 與 [實(shí)際量]，也因限制酶的種類不同而有差別，這些差別被認(rèn)為是酶同其識別位點(diǎn)周圍的結(jié)構(gòu)親和程度而產(chǎn)生的。例如， 限制酶Nae I 在切斷pBR322 DNA時(shí)，就有著非常難以切斷的部位。另外，因反應(yīng)液組成變化 （如添加精脒），也可以使切斷順序發(fā)生變化。 
4. DNA結(jié)合物質(zhì) 
限制酶切反應(yīng)后進(jìn)行電泳時(shí)，有時(shí)會(huì)發(fā)生電泳帶無法確認(rèn)、電泳帶擴(kuò)散、電泳帶移動(dòng)距離異常等問題，這是由于酶蛋白自身或其它雜蛋白與DNA結(jié)合在一起，使DNA沒有進(jìn)入電泳凝膠中，或DNA難以被溴乙錠染色而造成的。發(fā)生這些現(xiàn)象時(shí)，在試樣中加入一些蛋白質(zhì)變性劑 （如SDS，終濃度0.1%左右），便可改善電泳效果。 
5. 其它 
限制酶的保質(zhì)期一般是在檢定日以后的三年內(nèi)，但幾乎所有的限制酶在超過保質(zhì)期后都不會(huì)急劇失活，因此購入后即使是經(jīng)過長時(shí)間保存的酶，也*可以使用，但這些酶在使用前再測一次活性。另外，進(jìn)口原裝elisa試劑盒保存酶時(shí)即便讓其凍結(jié)，大部分酶也不會(huì)急劇失活。