ELISA 試劑盒的抗原和抗體

ELISA 試劑盒制備抗體：
根據(jù)項(xiàng)目溝通結(jié)果確定制備抗體的種類，一般夾心ELISA需要不同表位的抗體用做配對(duì)，建議同時(shí)進(jìn)行多克隆抗體和單克隆抗體的制備。確保的獲得靈敏度的配對(duì)方式。其他類型的ELISA根據(jù)具體情況選擇。
1、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫
使用部分制備的免疫原免疫2只新西蘭兔和5只BALB/c鼠分別用于多克隆抗體及單克隆抗體的制備。免疫4-5次，收集抗血清檢測(cè)效價(jià)，ELISA效價(jià)大于10萬(wàn)以上進(jìn)行多克隆抗血清收集及單克隆抗體雜交瘤制備。

2、 單克隆抗體雜交瘤制備
選擇與重組蛋白和天然蛋白免疫反應(yīng)強(qiáng)的小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合，通過(guò)ELISA篩選陽(yáng)性克隆，將陽(yáng)性克隆進(jìn)行亞克隆獲得陽(yáng)性細(xì)胞株。將陽(yáng)性克隆上清進(jìn)行表位鑒定，反應(yīng)性鑒定及親和力鑒定。選擇不同表位，反應(yīng)性強(qiáng)且親和力高的細(xì)胞株進(jìn)行后續(xù)抗體生產(chǎn)。
3、 抗體生產(chǎn)
多克隆抗血清進(jìn)行抗原親和純化，獲得特異性抗體10-20 mg。
單克隆抗體生產(chǎn)選擇所需陽(yáng)性細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增，腹水制備，通過(guò)蛋白A親和純化獲得3-5 mg 純化抗體。

ELISA 試劑盒制備
1、 抗原或抗體標(biāo)記
根據(jù)開發(fā)ELISA的類型確定標(biāo)記抗原或者抗體。一般標(biāo)記HRP 或者生物素。

2、 抗原抗體使用濃度優(yōu)化
檢測(cè)不同濃度抗原與抗體的反應(yīng)靈敏度，特異性。確定的抗原與抗體的使用濃度。
3、 包被條件及反應(yīng)條件優(yōu)化
確定包被緩沖液，洗滌緩沖液及酶結(jié)合物保存液；確定抗體反應(yīng)溫度及反應(yīng)時(shí)間。
4、 回收率測(cè)定
將標(biāo)準(zhǔn)品加入陰性樣品中確定回收率，需達(dá)到80%-120的回收范圍。
5、 批間差及批內(nèi)差測(cè)定
重復(fù)性檢測(cè)，批間差及批內(nèi)差需小于15%。
6、 穩(wěn)定性測(cè)試
通過(guò)37度破壞性試驗(yàn)檢測(cè)試劑盒在37度條件下3天，7天，10天，14天的表現(xiàn)。同時(shí)4度留樣以備長(zhǎng)期檢測(cè)。一般試劑盒可在4度存放1年。
7、 臨床樣品或真實(shí)樣本檢測(cè)
將客戶提供的其他方法驗(yàn)證的陽(yáng)性樣品和陰性樣品進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證檢測(cè)，確定符合率。
8、 試劑盒組裝
組裝5份ELISA試劑盒包括所有組分及說(shuō)明書