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    兔粘蛋白1(MUC1)檢測試劑盒操作說明

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                                   兔粘蛋白1(MUC1)檢測試劑盒操作說明

      有些事情是可以遺忘的,有些事情是可以紀(jì)念的,有些事情能夠心甘情愿,有些事情一直無能為力。我愛你,這是我的劫難。——安妮寶貝《八月未央》接下來介紹 兔粘蛋白1(MUC1)檢測試劑盒操作說明。

    操作流程:
    (1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
    (2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
    (3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
    (4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
    (5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 
    (6)洗板,同(4)。 
    (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
    (8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 
    (9)洗板,同(4)。 
    (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
    (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
    (12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
    (13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

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