白細胞激活黏附因子（ALCAM）檢測試劑盒

白細胞激活黏附因子(ALCAM)檢測試劑盒

操作步驟：

1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。

2. 分組：取出 96 孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準

品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。

標準品的稀釋：準備小試管6 只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul，然后取原濃度標準品100ul 加入

一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第三只

試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第五只試管中，充分

混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標準品。稀釋后各管濃度分別是：

800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L,50ng/L ,0ng/L。

注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。

3. 加樣：依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中先加樣

品 40ul 然后再加生物素標記的抗 IFN-γ 抗體 10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

4.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。

6. 加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入 50ul 的酶標溶液（空白對照孔除外）。

7. 溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時。

8. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標板 5 次，用吸水紙*拍干。

9. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。

10. 終止：25-37℃下避光反應 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液。

11. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。

白細胞激活黏附因子(ALCAM)檢測試劑盒注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的 30 分鐘內，以免影響準確性。